应用肌肉介导基因转移制备5,10亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)抗体

摘要

５，１０亚甲基四氢叶酸还原酶（ＭＴＨＦＲ）是叶酸代谢的关键酶．为了试验肌肉介导外源基因人ＭＴＨＦＲ（ｈＭＴＨＦＲ）制备抗体和建立ＭＴＨＦＲ免疫检测的可能性，构建了ＭＴＨＦＲ基因真核表达载体（ｐｃＤＮＡ３／ＭＴＨＦＲ）；通过基因缝线法将携带ｐｃＤＮＡ３／ＭＴＨＦＲ的质粒，缝合于预先注射再生剂（丁哌卡因）的肌肉内．２个月后分离血清，所得抗体应用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ，ＥＬＩＳＡ和胎肝免疫组织化学染色进行免疫鉴定．胎肝免疫组织化学显示，在肝小梁细胞浆中具有大量ＭＴＨＦＲ阳性反应颗粒；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ有ＭＴＨＦＲ抗体与其抗原特异的褐色条带，分子量约为３７ｋＤ；ＥＬＩＳＡ分析表明，３种不同浓度的抗体与不同剂量的抗原反应具有剂效关系，最适抗体滴度（ＥＤ５０）为１∶４００。以上结果说明肌肉介导外源基因是获得抗体的一种简单、快捷的方法．该抗体可用于ＭＴＨＦＲ的免疫检测和有关的叶酸代谢研究工作．