人白细胞介素-17基因的克隆、表达及其表达产物的分离纯化

摘要

利用ＲＴ－ＰＣＲ方法成功地从ＰＩ（ＰＭＡ，Ｉｏｎｏｍｙｃｉｎ）、ＰＨＡ活化的人Ｔ细胞中扩增出ｈＩＬ－１７编码区ｃＤＮＡ（４６８ｂｐ），克隆测序证实得到该基因．用特殊设计的引物扩增ｈＩＬ－１７成熟肽编码区（４１４ｂｐ），接入表达载体ｐＥＴ３０ａ质粒中．ｐＥＴ３０ａ－ｍｈＩＬ－１７在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中获得高效表达，目的蛋白占总菌体蛋白５０％左右．经凝胶过滤和阴离子交换层析两步分离纯化和复性，得到单体型ｒｍｈＩＬ－１７，纯度达９８％以上，Ｎ端１６个氨基酸序列分析，结果与文献报道一致．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法测定分子量为１６ｋＤ，薄层丙烯酰胺凝胶等电聚焦分析该蛋白等电点为ｐＨ８．８～８．９，３ＨＴｄＲ参入法测定ｒｍｈＩＬ－１７单体的体外活性，实验结果表明ｒｍｈＩＬ－１７对ＰＨＡ活化人的ＰＢＭＣ细胞具有抑制作用。