摘要：本文通过RACE和RT-PCR的方法,从雌性黄鳝的脑中克隆了脑型p450芳香化酶(P450aromB)的全长cDNA序列以及不同转录形式.黄鳝脑型p450芳香化酶cDNA全长2243bp,开放读码框编码497个氨基酸,具有芳香化酶的所有功能结构域:跨膜区,Ⅰ-螺旋区,Ozol's肽区,芳香化区和亚铁血红素结合区.黄鳝脑型p450芳香化酶存在多种转录形式,其中两种主要转录形式分别命名为P450aromB-a和P450aromB-b.P450aromB-a的cDNA长1258bp,和全长形式相比有两点不同:1)5'UTR不同,全长形式的5'UTR为202bp,而P450aromB-a为160bp,这是由于使用不同的TATAbox使得转录起始位点不同.2)这种截断的cDNA主要是因为使用了在第八个内含子内的加尾信号AUUAAA而造成的.这种转录子只能编码353个氨基酸,由于失去了亚铁血红素结合区而导致没有芳香化酶活性.P450aromB-b的cDNA长1030bp,缺失第二外显子,导致读码框后移,只能编码241个氨基酸.由于编码的蛋白缺失了亚铁血红素结合区和跨膜区,同样没有芳香化酶活性.这些结果提示,黄鳝脑型p450芳香化酶利用了选择性转录起始、选择性剪接和选择性转录中止等方法在转录水平和转录后水平对其基因表达进行调节.采用半定量RT-PCR检测了黄鳝脑型p450芳香化酶和性腺型p450芳香化酶在不同组织中的表达.结果显示:脑型p450芳香化酶在嗅球、端脑、下丘脑、视顶盖-丘脑、小脑、延髓和垂体中均有较高水平的表达;卵巢和精巢也有表达,且卵巢中的表达比精巢高;在脾脏,胰脏,肾脏,心脏,肝脏,肌肉,血液等组织均能检测到较低水平的表达.黄鳝的性腺型p450芳香化酶在生殖系统中的表达最高,且卵巢中的表达高于精巢;在嗅球、端脑、下丘脑、视顶盖-丘脑、小脑、延髓和垂体都有表达,其中下丘脑和垂体较高;在脾脏,胰脏,肾脏,心脏,肝脏,肌肉,血液等组织则没有能检测到性腺型p450芳香化酶的表达.
