人血管能抑素基因的克隆、表达及其表达产物的纯化和生物活性测定

摘要

以人胎盘脐带组织为材料,提取组织总RNA,用net-RT-PCR方法合成人血管能抑素cDNA基因,将该cDNA克隆进pSP72载体获得重组质粒pSP72C, DNA序列分析结果与预期序列一致.用BamHⅠ和NdeⅠ双酶切,切下pSP72C上的血管能抑素cDNA,插入pET-3c载体的相应位点获得重组表达质粒pETC, 转化E. coli BL21(DE3), SDS-PAGE分析显示:在IPTG诱导下,血管能抑素基因获得了高效表达,表达量约占菌体总蛋白的 27.9 %,主要以包涵体形式存在.包涵体经过洗涤、裂解、蛋白复性以及Sephadex G-75凝胶过滤层析等步骤后,获得了纯度达91.4 %的人血管能抑素.CAM实验证明10 μg纯化蛋白就能显著抑制鸡胚新生血管生成.