抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体的研制及其特性鉴定

摘要

以新生乳猪增殖猪流行性腹泻病毒（ＰＥＤＶ），通过蔗糖密度梯度离心将其纯化，获得较为完整的病毒颗粒。病毒ＥＬＩＳＡ效价为１∶３×１０５，蛋白含量为３．９６ｇ／Ｌ。将提纯的ＰＥＤＶ免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取免疫鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞进行融合，融合率为９５．６％。用间接ＥＬＩＳＡ进行筛选，共检出３８个阳性孔，阳性率为２８．８％。对其中１５个阳性值较高的孔进行３次再克隆，阳性率达１００％，最后获得１５株稳定分泌特异性抗ＰＥＤＶ单抗（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞。ＥＬＩＳＡ阻断试验与交叉试验证明，其分泌的抗体具有高度特异性。腹水和细胞培养上清的ＥＬＩＳＡ效价分别为１∶１０３～１∶１０６和１∶１２８～１∶５１２。经鉴定，１５株ＭｃＡｂ的分子类型均为ＩｇＧ，均无免疫沉淀特性。杂交瘤细胞的染色体数目为９０～１１０，平均９５。尤为重要的是，这些杂交瘤细胞所分泌的抗体，有的对ＰＥＤＶ具有中和作用，能够阻断病毒对猪只的侵害作用。