葡萄糖/葡萄糖氧化酶诱导H9c2心肌细胞凋亡模型的建立

摘要

目的 研究不同浓度高糖(glucose,G)/葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GO)对H9c2细胞凋亡的影响,以确定建立H9c2细胞因糖自氧化所致凋亡模型的合适浓度.方法 在含33 mmol/L葡萄糖的高糖培养液中以不同浓度的GO干预H9c2细胞12h,MTT比色法检测H9c2细胞的存活率;光学显微镜下观察H9c2细胞形态学；AnnexinV/PI结合流式细胞仪检测凋亡率；2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)探针检测细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平.结果 (1)随G/GO浓度增加,H9c2细胞的存活率逐渐降低,其中1.6 mU/mL、2 mU/mL、2.4 mU/mL和2.8 mU/mL组存活率显著低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)；其中G(33 mmol/L)/GO(2 mU/mL)的存活率为49.3％±6.7％.(2)随G/GO浓度增加,H9c2细胞的细胞凋亡率逐渐升高,细胞呈现典型的凋亡特征,其中1.6 m U/mL、2 mU/mL、2.4 mU/mL和2.8 mU/mL凋亡率显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)；其中G(33 mmol/L)/GO(2 mU/mL)的细胞凋亡率为44.56％±3.02％.(3)G(33 mmol/L)/GO(2 mU/mL)作用H9c2细胞12h时,ROS含量显著高于对照组,差异有统计学意义(荧光强度:47.70％±2.09％ vs.17.59％±0.75％,P＜0.05).结论 G/GO引起的H9c2细胞氧化应激所致的凋亡有剂量依赖性,G(33 mmol/L)/GO(2 mU/mL)是建立H9c2心肌细胞凋亡模型的合适浓度.