H9c2细胞

摘要： 背景:老年缺血性心脏损伤患者自体干细胞移植治疗效果欠佳,需要探索提高老年干细胞修复再生能力的有效途径。目的:探讨低氧预处理老年人骨髓间充质干细胞条件培养基对心肌的保护作用,为改善老年患者自体干细胞移植疗效提供实验支持。方法:将青年人骨髓间充质干细胞置于常氧培养箱培养,老年人骨髓间充质干细胞分别置于常氧和低氧培养箱培养,收集条件培养基分为青年常氧培养基组、老年常氧培养基组和老年低氧培养基组。H9C2细胞用3种条件培养基在常氧培养箱中培养24 h后,加入300μmol/L过氧化氢继续培养30 min诱导氧化应激,采用CCK-8法检测细胞活性,活性氧试剂盒检测活性氧水平反映氧化应激损伤程度,Western blot检测Bax、Bcl-2表达量反映细胞凋亡水平,Western blot检测p-AKT表达量反映AKT活化水平。另外,老年低氧培养基处理及过氧化氢诱导细胞氧化应激前,用含50μmol/L LY294002的DMEM培养液培养2 h,以阻断PI3K/AKT通路的激活,然后采用CCK-8法检测细胞活性。结果与结论:①与老年常氧培养基组比较,老年低氧培养基组H9C2细胞活力显著增加(P<0.01);凋亡相关蛋白Bax表达显著降低(P<0.05),凋亡抑制蛋白Bcl-2表达显著增高(P<0.05);活性氧水平显著降低(P<0.05);②与老年常氧培养基组比较,老年低氧培养基组H9C2细胞中p-AKT蛋白表达显著增高(P<0.05);③与老年低氧培养基组比较,应用LY294002抑制PI3K/AKT信号通路后,H9C2细胞活力下降(P<0.05);④结果提示,低氧预处理老年人骨髓间充质干细胞条件培养基通过AKT通路减弱H9C2细胞氧化应激损伤,减少细胞凋亡,提高细胞活性。

摘要： 背景:老年缺血性心脏损伤患者自体干细胞移植治疗效果欠佳,需要探索提高老年干细胞修复再生能力的有效途径.目的:探讨低氧预处理老年人骨髓间充质干细胞条件培养基对心肌的保护作用,为改善老年患者自体干细胞移植疗效提供实验支持.方法:将青年人骨髓间充质干细胞置于常氧培养箱培养,老年人骨髓间充质干细胞分别置于常氧和低氧培养箱培养,收集条件培养基分为青年常氧培养基组、老年常氧培养基组和老年低氧培养基组.H9C2细胞用3种条件培养基在常氧培养箱中培养24 h后,加入300 μmol/L 过氧化氢继续培养30 min诱导氧化应激,采用CCK-8法检测细胞活性,活性氧试剂盒检测活性氧水平反映氧化应激损伤程度,Western blot检测Bax、Bcl-2表达量反映细胞凋亡水平,Western blot检测p-AKT表达量反映AKT活化水平.另外,老年低氧培养基处理及过氧化氢诱导细胞氧化应激前,用含50 μmol/L LY294002的DMEM培养液培养2 h,以阻断PI3K/AKT通路的激活,然后采用CCK-8法检测细胞活性.结果与结论:①与老年常氧培养基组比较,老年低氧培养基组H9C2细胞活力显著增加(P ＜ 0.01);凋亡相关蛋白Bax表达显著降低(P ＜0.05),凋亡抑制蛋白Bcl-2表达显著增高(P ＜ 0.05);活性氧水平显著降低(P ＜ 0.05);②与老年常氧培养基组比较,老年低氧培养基组H9C2细胞中p-AKT蛋白表达显著增高(P ＜ 0.05);③与老年低氧培养基组比较,应用LY294002抑制PI3K/AKT信号通路后,H9C2细胞活力下降(P ＜0.05);④结果提示,低氧预处理老年人骨髓间充质干细胞条件培养基通过AKT通路减弱H9C2细胞氧化应激损伤,减少细胞凋亡,提高细胞活性.

摘要： 目的探讨miR-204-5p对缺氧复氧诱导大鼠心肌细胞H9C2氧化应激的调控作用机制。方法体外培养大鼠胚胎心肌细胞H9C2,构建心肌细胞缺氧/复氧模型。实验分为空白组、缺氧复氧组、缺氧复氧+miR-con组、缺氧复氧+miR-204-5p组、缺氧复氧+miR-204-5p+pcDNA组、缺氧复氧+miR-204-5p+pcDNA-蛋白质酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)组。实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Westernblotting)检测miR-204-5p和PTP1B的表达。双荧光素酶报告基因实验和Westernblotting验证miR-204-5p和PTP1B的靶向调控关系。四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法检测心肌细胞存活率。试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白(cTnT)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧簇(ROS)和丙二醛(MDA)水平变化。流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况。结果缺氧复氧处理可显著抑制心肌细胞miR-204-5p表达,促进PTP1B表达。PTP1B是miR-204-5p的靶基因,miR-204-5p可负性调控PTP1B的表达。缺氧复氧处理显著抑制细胞存活,降低SOD水平,提高LDH、ROS和MDA水平,促进细胞凋亡。过表达miR-204-5p可降低LDH、ROS和MDA水平,促进细胞存活,降低细胞凋亡;过表达PTP1B可部分削弱miR-204-5p过表达对缺氧复氧诱导心肌细胞凋亡和氧化应激的影响。结论miR-204-5p通过靶向下调PTP1B抑制心肌细胞氧化应激,促进细胞存活,抑制细胞凋亡,对心肌细胞发挥保护作用。

摘要： 目的 研究右美托咪定对缺氧/复氧(H/R)条件下心肌细胞PTEN诱导激酶1(PINK1)/E3泛素连接酶(Parkin)通路介导的线粒体自噬的影响,以明确右美托咪定保护心肌细胞的相关作用机制。方法 体外培养H9C2细胞,将细胞分为空白对照组、H/R组、右美托咪定低剂量组(0.1μmol/L右美托咪定+H/R)、右美托咪定中剂量组(1.0μmol/L右美托咪定+H/R)、右美托咪定高剂量组(10.0μmol/L右美托咪定+H/R)。采用3-2(4,5-二甲基噻唑-2)-2-四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测各组H9C2细胞增殖能力;检测超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、活性氧簇(ROS)水平;透射电镜下观察线粒体自噬情况;JC-1法检测线粒体膜电位(MMP);免疫印迹法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3(LC3)、家蚕隔离体蛋白1(p62)、PINK1/Parkin通路相关蛋白表达情况。结果 与空白对照组比较,H/R组H9C2细胞增殖抑制率、自噬小体数量、MDA含量、ROS水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及PINK1、Parkin蛋白表达水平明显升高(P<0.05),MMP水平、SOD活性及p62蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与H/R组比较,右美托咪定低、中、高剂量组H9C2细胞增殖抑制率、自噬小体体数量、MDA含量、ROS水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及PINK1、Parkin蛋白表达水平明显降低(P<0.05),MMP水平、SOD活性及p62蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论 右美托咪定可能通过抑制H/R条件下PINK1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬,保护H9C2细胞免受氧化应激损伤。

摘要： 目的探讨木蝴蝶总黄酮对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导H9C2损伤的影响及其对程序性细胞死亡因子(PDCD)5的调控作用。方法体外培养大鼠心肌细胞H9C2,采用H_(2)O_(2)处理建立细胞损伤模型,分别使用不同浓度的木蝴蝶总黄酮处理细胞;甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;酶联免疫吸附试验试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性;Western印迹检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)3、caspase9、PDCD5的蛋白表达量;分别将pcDNA3.1-PDCD5转染至心肌细胞,采用上述方法检测细胞增殖、凋亡率及caspase3、caspase9蛋白表达量。结果木蝴蝶总黄酮处理后,细胞活力及SOD、GSH-Px的活性显著升高(P<0.05),细胞凋亡率,caspase3、caspase9、PDCD5蛋白水平及MDA的含量显著降低(P<0.05);PDCD5过表达后,细胞活力及SOD、GSH-Px的活性显著降低(P<0.05),细胞凋亡率,caspase3、caspase9蛋白水平及MDA的含量显著升高(P<0.05);PDCD5过表达可减弱木蝴蝶总黄酮对H_(2)O_(2)诱导的心肌细胞损伤的影响。结论木蝴蝶总黄酮可能通过抑制PDCD5的表达而促进H_(2)O_(2)诱导的心肌细胞增殖及抑制细胞凋亡、氧化应激从而保护心肌细胞。

摘要： 目的 研究芝麻素减轻H9c2细胞因缺氧/复氧引起的损伤及机制。方法 采用CCK-8法筛选芝麻素(0、5、10、20、40、80μmol/L)作用H9c2细胞的最大无毒浓度。将H9c2细胞分成正常组、模型组、芝麻素组(20μmol/L),模型组与芝麻素组进行缺氧3 h,复氧3 h造模处理,正常组细胞不进行缺氧/复氧与给药干预。采用CCK-8法检测细胞增殖率,分光光度计法检测细胞上清液中SOD、LDH活性和MDA水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,透射电镜观察细胞自噬体形成情况,蛋白质印迹法检测细胞中PI3K、Akt、mTOR与LC3B蛋白表达。结果 芝麻素作用于H9c2细胞的最大无毒浓度为20μmol/L。与正常组比较,模型组H9c2细胞增殖率、SOD活性及PI3K、Akt、mTOR、LC3BⅠ蛋白表达降低,MDA水平、LDH活性、细胞凋亡率、自噬水平及LC3BⅡ蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,芝麻素组能改善以上指标(P<0.01)。结论 芝麻素能减轻H9c2细胞因缺氧/复氧引起的损伤,调节细胞内氧化应激平衡,降低细胞凋亡与细胞自噬水平,其机制可能与激活PI3K/Akt/mTOR信号通路相关。

摘要： 研究小叶黄杨(Buxus sinica var.parvifolia M.Cheng)叶子的化学成分及心肌细胞保护作用。综合运用硅胶、Sephadex LH-20、MCI、半制备液相等多种色谱分离方法,对小叶黄杨中等极性部位进行分离纯化,采用波谱学技术对分离的单体化合物进行结构鉴定。另外,对提取各部位和分离得到的14个化合物进行体外心肌细胞保护作用测试。从小叶黄杨干燥叶中共分离得到14个化合物,分别为香草酸乙酯(1)、香草醛(2)、花椒毒素(3)、反式对羟基肉桂酸乙酯(4)、3,4,5-trimethoxycinnamyl alcohol(5)、丁香酸乙酯(6)、(S)-5-hydroxy-3,4-dimethyl-5-pentylfuran-2(5 H)-one(7)、桦木酸(8)、4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲醛(9)、7,3′,4′-三甲基槲皮素(10)、白桦脂醇(11)、penduletin(12)、23-O-(E)-p-coumaroyl-23-hydroxybetulin(13)、松脂素(14)。其中化合物2、5和6为首次从该植物中分离得到,体外实验表明EA部位和化合物14(松脂素)可显著改善H_(2)O_(2)诱导的心肌细胞损伤。

摘要： [目的]研究左西孟旦对缺氧复氧(H/R)条件下H9c2细胞凋亡的影响及相关机制。[方法]体外培养H9c2细胞,将细胞分为空白对照组、H/R组、左西孟旦低剂量组、左西孟旦中剂量组、左西孟旦高剂量组。采用四甲基偶氮噻唑蓝法检测H9c2细胞增殖;流式细胞仪检测H9c2细胞凋亡;超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、丙二醛(MDA)试剂盒分别检测SOD活性及MDA含量;荧光探针法检测活性氧(ROS)水平;Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路蛋白表达。[结果]与空白对照组比较,H/R组H9c2细胞增殖抑制率、凋亡率、MDA含量、ROS水平、PTEN蛋白表达均显著升高(P<0.05),PCNA、Bcl-2、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt均显著降低,Bax显著升高(P<0.05)。与H/R组比较,左西孟旦低剂量组、左西孟旦中剂量组、左西孟旦高剂量组H9c2细胞增殖抑制率、凋亡率、MDA含量、ROS水平、PTEN蛋白表达均显著降低(P<0.05),PCNA、Bcl-2、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt均显著升高,Bax显著降低(P<0.05);且左西孟旦剂量越高,上述指标的相应变化越明显。[结论]左西孟旦可能通过抑制PTEN并激活PI3K/Akt信号通路,促进H/R条件下H9c2细胞增殖,抑制细胞氧化应激和凋亡。

摘要： 目的研究在其他培养条件相同的情况下不同类型新生牛血清对H9c2细胞体外培养的影响,为更加合理选择H9c2细胞生长适应的血清类型提供参考依据。方法采用牦牛血清、Hyclone血清、四季青血清3种牛血清对H9c2细胞进行培养,通过细胞计数法和CCK8法测定细胞生长的细胞数量及活力,并在镜下观察细胞形态,以比较3种血清细胞培养的效果,采用q-PCR测定p21、p16、p38、p53表达情况以了解细胞衰老情况。结果牦牛血清培养细胞的细胞数在第2~6天均显著高于四季青血清,在第2天显著高于Hyclone血清,差异均有统计学意义(P0.05);Hyclone血清培养细胞的细胞数在第3~6天均显著高于四季青血清(P0.05);此外,与牦牛血清和Hyclone血清比较,四季青血清H9c2细胞p21、p53表达最高。结论牦牛血清的细胞培养效果优于Hyclone血清和四季青血清,H9c2细胞可能更适应于在牦牛血清中生长。

摘要： 目的明确七氟醚后处理对缺血再灌注大鼠心肌损伤的保护作用,初步阐明其对心肌内质网应激反应的影响及可能靶点。方法取SPF级雄性SD大鼠55只,建模取25只,每组5只,分为对照组(sham)和缺血再灌注组(I/R),每组5只。I/R组分别于缺血30 min之后进行再灌注2、4、6和8 h,制造在体心脏左冠状动脉前降支结扎缺血再灌注动物模型,获取心肌损伤和内质网应激反应最理想模型参数。实验取大鼠30只,随机数字表法分为sham组、I/R组、七氟醚后处理组(sevoP,分为2.5%、3.0%亚组)、4-苯基丁酸(4-PBA)复合七氟醚组(4-PBA+2.5%、3.0%sevoP组)。sevoP组在行微创左冠状动脉前降支结扎后,即刻吸入相应浓度的七氟醚15 min后洗脱,松开结扎线恢复血流至额定时间,观测心肌HE形态,血清的乳酸脱氢酶(LDH)、肌钙蛋白(cTnI),以及组织的GRP78、CHOP mRNA和蛋白表达,sham组只放线不结扎。利用体外H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤模型(3H/3R),除正常对照组和H/R组外,sevoP组复氧前以2.5%七氟醚处理缺氧箱内H9C2细胞30 min,另两组H9C2细胞分别以小干扰肌浆网Ca^(2+)-ATP酶(siSERCA)和阴性对照(ncSERCA)处理48 h后进行sevoP同样的操作,检测上清液中的上述指标,以及细胞内质网应激蛋白指标。结果与sham组比较,I/R组大鼠心肌缺血0.5 h再灌注2 h后血清LDH[(5.62±0.68)U/L比(3.44±0.54)U/L,P<0.05]、cTnI[(5.64±1.01)ng/mL比(2.72±0.61)ng/mL,P<0.05]浓度的升高,GRP78蛋白表达到缺血0.5 h再灌注6 h后才增高明显[(2.36±0.49)比(0.38±0.18),P<0.05]。与Sham组比较,I/R组大鼠肺组织GRP78、CHOP的mRNA显著高表达(22.22±8.22比1.02±0.27,14.84±2.49比1.01±0.22,P均<0.05),蛋白表达也同样增加(0.59±0.11比2.06±0.36,0.44±0.12比1.97±0.42,P均<0.05)。七氟醚后处理能够有效抑制其高表达,4-PBA能够进一步减弱七氟醚的抑制作用。H9C2细胞的H/R损伤和内质网应激可以引起GRP78和CHOP的4倍高表达和细胞上清液中LDH浓度上升(834.60±93.70比417.60±57.07,P<0.05),以2.5%七氟醚后处理降低过度升高的GRP78和CHOP(1.52±0.38比2.46±0.50,1.32±0.23比2.10±0.43,P均<0.05),siSERCA+sevoP+H/R组基因敲低能够减弱七氟醚的保护作用。结论七氟醚后处理可能能够抑制心肌的缺血再灌注损伤和过度的内质网应激,与心肌细胞Ca^(2+)-ATP酶活性有关。

摘要： 本发明属于中药技术领域，具体涉及一种九味痔疮片的制备方法及应用。本发明的九味痔疮片的制备方法，由三月泡400g、虎杖150g、地榆200g、柳寄生100g、无花果叶100g、菊花50g、鸡子白20g、黄连150g、大黄50g作为原料药制成，采用超临界萃取和微波萃取制备而成，使得大黄素含量有很大提高。本发明还提供了九味痔疮片在制备抑制小鼠淋巴瘤细胞YAC-1细胞增殖药物中的应用。

摘要： 本发明属于中药技术领域，具体涉及一种九味獐牙菜片的制备方法及应用。本发明的九味獐牙菜片的制备方法，由獐牙菜53.6g、金腰草17.9g、榜嘎35.7g、木香35.7g、兔耳草35.7g、苦荬菜42.9g、角茴香35.7g、小檗皮28.6g、波棱瓜子14.2g作为原料药制成，采用超临界萃取、微波萃取和大孔树脂吸附制备而成，使得盐酸小檗碱含量有很大提高。本发明还提供了九味獐牙菜片在制备抑制小鼠肥大细胞瘤细胞P815细胞增殖药物中的应用。

摘要： 本发明属于中药技术领域，具体涉及一种九味獐牙菜片的制备方法及应用。本发明的九味獐牙菜片的制备方法，由獐牙菜53.6g、金腰草17.9g、榜嘎35.7g、木香35.7g、兔耳草35.7g、苦荬菜42.9g、角茴香35.7g、小檗皮28.6g、波棱瓜子14.2g作为原料药制成，采用超临界萃取、微波萃取和大孔树脂吸附制备而成，使得盐酸小檗碱含量有很大提高。本发明还提供了九味獐牙菜片在制备抑制小鼠肝癌细胞Hepa1-6细胞增殖药物中的应用。

摘要： 本发明属于中药技术领域，具体涉及一种九味獐牙菜片的制备方法及应用。本发明的九味獐牙菜片的制备方法，由獐牙菜53.6g、金腰草17.9g、榜嘎35.7g、木香35.7g、兔耳草35.7g、苦荬菜42.9g、角茴香35.7g、小檗皮28.6g、波棱瓜子14.2g作为原料药制成，采用超临界萃取、微波萃取和大孔树脂吸附制备而成，使得盐酸小檗碱含量有很大提高。本发明还提供了九味獐牙菜片在制备抑制小鼠淋巴样瘤细胞P388D1细胞增殖药物中的应用。

摘要： 本发明属于中药技术领域，具体涉及一种九味獐牙菜片的制备方法及应用。本发明的九味獐牙菜片的制备方法，由獐牙菜53.6g、金腰草17.9g、榜嘎35.7g、木香35.7g、兔耳草35.7g、苦荬菜42.9g、角茴香35.7g、小檗皮28.6g、波棱瓜子14.2g作为原料药制成，采用超临界萃取、微波萃取和大孔树脂吸附制备而成，使得盐酸小檗碱含量有很大提高。本发明还提供了九味獐牙菜片在制备抑制小鼠肝癌细胞H22细胞增殖药物中的应用。

摘要： 本发明属于中药技术领域，具体涉及一种九味獐牙菜片的制备方法及应用。本发明的九味獐牙菜片的制备方法，由獐牙菜53.6g、金腰草17.9g、榜嘎35.7g、木香35.7g、兔耳草35.7g、苦荬菜42.9g、角茴香35.7g、小檗皮28.6g、波棱瓜子14.2g作为原料药制成，采用超临界萃取、微波萃取和大孔树脂吸附制备而成，使得盐酸小檗碱含量有很大提高。本发明还提供了九味獐牙菜片在制备抑制小鼠畸胎瘤细胞P19细胞增殖药物中的应用。

摘要： 本发明属于中药技术领域，具体涉及一种九味獐牙菜片的制备方法及应用。本发明的九味獐牙菜片的制备方法，由獐牙菜53.6g、金腰草17.9g、榜嘎35.7g、木香35.7g、兔耳草35.7g、苦荬菜42.9g、角茴香35.7g、小檗皮28.6g、波棱瓜子14.2g作为原料药制成，采用超临界萃取、微波萃取和大孔树脂吸附制备而成，使得盐酸小檗碱含量有很大提高。本发明还提供了九味獐牙菜片在制备抑制小鼠腹水瘤细胞SAC-ⅡB2细胞增殖药物中的应用。

摘要： 本发明属于中药技术领域，具体涉及一种九味獐牙菜片的制备方法及应用。本发明的九味獐牙菜片的制备方法，由獐牙菜53.6g、金腰草17.9g、榜嘎35.7g、木香35.7g、兔耳草35.7g、苦荬菜42.9g、角茴香35.7g、小檗皮28.6g、波棱瓜子14.2g作为原料药制成，采用超临界萃取、微波萃取和大孔树脂吸附制备而成，使得盐酸小檗碱含量有很大提高。本发明还提供了九味獐牙菜片在制备抑制小鼠黑色素瘤细胞B16细胞增殖药物中的应用。

摘要： 本发明属于中药技术领域，具体涉及一种九味獐牙菜片的制备方法及应用。本发明的九味獐牙菜片的制备方法，由獐牙菜53.6g、金腰草17.9g、榜嘎35.7g、木香35.7g、兔耳草35.7g、苦荬菜42.9g、角茴香35.7g、小檗皮28.6g、波棱瓜子14.2g作为原料药制成，采用超临界萃取、微波萃取和大孔树脂吸附制备而成，使得盐酸小檗碱含量有很大提高。本发明还提供了九味獐牙菜片在制备抑制小鼠骨髓瘤细胞SP2/0细胞增殖药物中的应用。

摘要： 本发明属于中药技术领域，具体涉及一种九味獐牙菜片的制备方法及应用。本发明的九味獐牙菜片的制备方法，由獐牙菜53.6g、金腰草17.9g、榜嘎35.7g、木香35.7g、兔耳草35.7g、苦荬菜42.9g、角茴香35.7g、小檗皮28.6g、波棱瓜子14.2g作为原料药制成，采用超临界萃取、微波萃取和大孔树脂吸附制备而成，使得盐酸小檗碱含量有很大提高。本发明还提供了九味獐牙菜片在制备抑制小鼠肺癌细胞LLC细胞增殖药物中的应用。