siRNA敲减NEK2表达可提高结直肠癌细胞对5-FU的化疗敏感性

摘要

目的:探讨敲减中心体相关激酶2（never in mitosis A-related kinase 2,NEK2）对结直肠癌细胞5-FU化疗敏感性的影响及其可能的机制。方法:采用qPCR和Western blotting检测结直肠癌细胞中NEK2 mRNA及蛋白的表达水平。构建针对NEK2基因的小干扰RNA（siRNA）并转染至结直肠癌细胞HCT116及SW620,实验分为阳性干扰组1（转染NEK2 siRNA1）、阳性干扰组2（转染NEK2 siRNA2）和阴性对照组（转染si-NC）,均用5-FU处理。采用CCK-8实验、V-FICT/PI Annexin双染色流式细胞术实验观察敲减NEK2基因对5-FU作用下结肠癌细胞的增殖、周期分布及凋亡的影响,采用Western blotting检测敲减NEK2基因对5-FU作用下结直肠癌细胞内Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响。结果:NEK2蛋白及mRNA在结直肠癌细胞HCT116、SW620中均呈高表达（P＜0.05或P＜0.01）,转染NEK2 siRNA可高效抑制HCT116、SW620细胞中NEK2蛋白及mRNA表达（均P＜0.01）。经不同浓度5-FU作用后,阳性干扰组1和阳性干扰组2的细胞存活率和IC50均显著低于阴性对照组（均P＜0.01）,细胞发生G0/G1期阻滞且凋亡率显著升高（均P＜0.01）,胞核β-catenin、c-myc和cyclin D1表达水平显著下降而胞质β-catenin表达水平升高（均P＜0.01）。结论:敲减NEK2基因可有效提高人结直肠癌细胞对5-FU的化疗敏感性,该作用可能是通过调控Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达来实现的。