鳖血柴胡饮片核酸提取及动物源性成分PCR查验方法研究

摘要

目的建立鳖血柴胡饮片核酸提取技术及动物源性成分的PCR检测方法,对鳖血柴胡制品中存在的鳖血掺杂使假情况进行检验。方法针对鳖血柴胡饮片中可能的鳖血替代物,以物种线粒体基因组为靶序列,设计特异性引物,分别建立中华鳖、巴西龟、猪、牛、羊、驴、马、兔、鸡、鸭、鹅等11个物种的PCR检测方法,对方法的灵敏度、特异性进行验证,并将建立的方法应用于鳖血柴胡饮片模拟样品及市售鳖血柴胡饮片的鉴定。同时,为提升检测效果,应用试剂盒、CTAB法、碱裂解法3种方法对鳖血柴胡饮片核酸提取效果进行比较,结合炮制中药饮片的特殊性,对核酸提取方法进行优化。结果建立的11个物种的PCR方法的特异性良好,均不与其他物种发生交叉反应,灵敏度在0.002~0.130 ng/反应之间。优化并建立了饮片“超声+真空冷冻干燥+CTAB提取”DNA提取三步法,可保证DNA质量和成分检测。应用建立的方法对市售的鳖血柴胡饮片成品进行检测,26份产品中仅18份饮片检测到鳖源性成分,其中3份检测到掺杂其他物种成分,8份未检测到相关物种信息。结论建立了针对鳖血柴胡饮片中微量物种源性成分的检测方法,并优化了其DNA提取方法,可用于鳖血柴胡相关指标的检验,作为药品监管执法依据。