嗅鞘细胞在大鼠坐骨神经缺损修复中的炎性调节作用研究

摘要

目的探讨嗅鞘细胞（olfactory ensheathingcell，OEC）移植修复大鼠坐骨神经缺损后，其在修复过程中对坐骨神经局部微环境内炎性因子表达的调节作用。方法取绿色荧光蛋白（green fluorescent protein, GFP ）转基因SD大鼠嗅球，原代培养GFP—OEC并鉴定。取100只SD大鼠随机分为两组，制备右侧坐骨神经缺损（10mm长）模型后，采用聚乳酸一聚羟基乙酸共聚物[poly （lactic acid-co-glycolic acid）, PLGA]神经导管修复缺损处，实验组（n=55）于导管两端注入GFP—OEC与细胞外基质（extrace Uularmatrix，ECM）的混合液，对照组（n=45）注入等量DMEM与ECM的混合液。术后观察大鼠一般情况，于6h、1d、3d以及1、2、3、4、6周Westernblot检测IL-4、IL-6、IL-13和TNF—α的表达；术后2、4、6周实验组取材观察GFP—OEC存活情况；9周两组取材行HE染色观察神经组织形态，并行坐骨神经感觉及运动功能检测、神经电生理检测。结果经免疫荧光染色鉴定，原代培养细胞为GFP—OEC。Westernblot检测显示，与对照组比较，2～6周实验组IL-4相对表达量明显升高，3d、1周时IL-6及TNF—α相对表达量降低，1d以及3～6周时IL-13相对表达量升高，比较差异有统计学意义（P〈0．05）。术后2、4、6周荧光显微镜下观察，实验组神经移植体内的神经再生端均有GFP—OEC存活；术后9周，HE染色示实验组再生神经组织较松散，细胞形态不规则；对照组再生神经组织成泡状空隙，细胞明显减少。术后9周，实验组大鼠坐骨神经功能恢复程度优于对照组，后足回缩时间、坐骨神经功能指数、肌肉动作电位潜伏期及复合肌肉动作电位波幅比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论坐骨神经缺损后植入OEC可促进抗炎因子IL-4和IL-13的表达，同时抑制促炎因子IL-6和TNF-α的表达，改善了坐骨神经局部的炎症微环境，进而有效地促进坐骨神经结构和功能的修复重建。