人TNF-α突变体Y87H/A145R的表达及纯化

摘要

用大肠杆菌表达人肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的突变体Y87H/A145R,并研究其生物学特性。在5 L发酵罐中培养大肠杆菌工程菌,当菌体密度(D600)增长到35时,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目标蛋白表达,包涵体蛋白的最终表达水平为2.5 g/L。用High Q Micro-prep凝胶柱纯化包涵体蛋白,然后通过透析复性,蛋白纯度大于99%。用分子排阻色谱分析Y87H/A145R的分子特征。结果表明,Y87H/A145R与TNF-α一样,以三聚体形式存在。而且,Y87H/A145R能明显抑制TNF-α诱导的L929细胞凋亡。小鼠试验表明,突变体Y87H/A145R不但失去了TNF-α的细胞毒性,并且能有效抑制TNF-α引起的急性肝坏死。