人La蛋白突变体表达质粒的构建及诱导表达纯化

摘要

目的:构建人La蛋白(humanLaprotein,hLa)突变体表达质粒,并在大肠杆菌中表达野生型La蛋白及各突变体。方法:利用定点突变技术,对野生型人La蛋白的原核表达质粒pET28bhLa进行定向缺失突变,将得到的3个突变体Mu1(A366)、Del1(A235～276)、Del2(A119～150)分别克隆至pET28b中,获得野生型人La蛋白突变体的表达质粒,并在BL21(DE3)和Rosetta2两种不同宿主菌中和不同浓度的IPTG诱导条件下进行蛋白表达水平的比较。结果:所获得的人La蛋白突变体的基因编码序列经测序符合序列设计的要求,表达产物经SDSPAGE分析可见,在相对分子质量47000处出现一明显条带,与预期的相对分子质量一致。结论:三个位点的序列改变并没有明显影响hLa蛋白的表达,在补充密码子的宿主菌Rosetta2中的表达量优于宿主菌BL21(DE3)。