酶法结合D500大孔树脂分离纯化粗品肝素

摘要

目的探讨酶法结合D500大孔树脂吸附交换分离纯化粗品肝素的效果,以替代传统的氧化法。方法以肝素粗品为原料,采用胰蛋白酶水解法去除原料中的蛋白杂质,结合大孔树脂吸附交换精制粗品肝素。通过生色底物法测定精品肝素的效价,并计算效价回收率。结果酶解液用D500大孔树脂分离纯化的最佳动态吸附条件为:吸附温度55℃,肝素溶液的盐浓度2.8°Bé,肝素溶液p H 8.5,进样浓度2.5 mg/ml,流速1.5 ml/min;最佳解吸条件为:解吸温度50℃,洗脱速度1.0 ml/min,洗脱剂浓度19°Bé,p H 8.5。在此条件下制得的精品肝素效价最高达189 IU/mg,比原料(78 IU/mg)提高2.42倍,且效价回收率为97.2%。结论利用蛋白酶结合大孔树脂吸附交换的方法对粗品肝素进行精制,可减少对精制过程中肝素生物效价的破坏,且提高了精品肝素的得率,该方法可替代传统氧化法精制肝素,为粗品肝素的分离纯化提供了新的方法。