Keap1/Nrf2/ARE通路相关基因在热诱导的氧化应激小鼠肝脏中的表达

摘要

为了研究热应激对小鼠肝脏抗氧化功能及Keap1(kelch-like ECH-associated protein-1)/Nrf2(NF-E2-related factor 2)/ARE(antioxidant response element)通路相关基因表达的影响,选用30只8周龄雄性小鼠随机分成6组,每d连续42℃热处理2 h,分别在热处理0 d(对照组)、1 d、2 d、4 d、8 d和12 d时观察肝脏组织形态学和免疫组织化学分析,另取一部分肝脏组织保存于-80℃用于后续荧光定量PCR实验,检测肝脏抗氧化指标及Keap1/Nrf2/ARE通路相关基因的表达.结果显示:小鼠的体表温度和直肠温度在热处理后都极显著高于热处理前.组织形态学观察发现,热处理导致小鼠肝脏组织充血和肝细胞水肿.小鼠肝脏氧化应激指标MDA(malondialdehyde)含量在热处理第2 d较对照组显著升高,GSH(glutathione)含量、GSH-PX(glutathione peroxidase)活力和总SOD(superoxide dismutase)活力在第4 d和12 d都有升高.免疫组织化学发现,与对照组和第12 d组相比,Nrf2蛋白在第1 d,2 d,4 d,8 d表达明显,其中Nrf2蛋白在第4 d表达最为显著.荧光定量RT-PCR结果表明,与对照组比较Keap1基因的表达量从热处理第1 d开始显著降低,Nrf2基因的表达量在第4 d和12 d显著升高,HO-1(Heme oxygenase-1)基因的表达量在第1 d显著升高,NQO1(Quinone oxidoreductase)和GCLC(Glutamate cysteine ligase catalytic)基因的表达量在第1 d和4 d显著升高.上述结果表明,热应激引起了小鼠肝脏氧化损伤,Keap1/Nrf2/ARE通路可能参与了肝脏自身缓解热应激的过程.