柔红霉素生物合成基因簇的克隆及其基因打靶研究

摘要

本研究通过构建柔红霉素产生菌天蓝淡红链霉菌Streptomyces coeruleorubidus DM的基因组文库,获得2 230个重组克隆。利用菌落原位杂交和PCR筛选获得黏粒Cosmid 8-22,其插入片段大小为41 431 bp,含36个完整的开放阅读框,基本包含了完整的柔红霉素生物合成基因簇。利用黏粒Cosmid 8-22成功构建了基因打靶系统,同时敲除部分dau W和完整的dnr X基因。HPLC结果显示,敲除突变株的柔红霉素产量较出发菌提高了3~4倍。