柔红霉素生物合成基因簇的克隆以及基因打靶研究

摘要

本研究通过构建柔红霉素产生菌天蓝淡红链霉菌DM的基因组文库,获得2230个重组克隆。利用菌落原位杂交和PCR两种筛选方法获得黏粒Cosmid8-22,其插入片段的大小为41431bp,含36个完整的开放阅读框,基本包含了完整的柔红霉素生物合成基因簇。利用黏粒cosmid8-22,构建PCR-Targeting系统,同时敲除dauW,dnrX基因。HPLC分析敲除突变株的柔红霉素产量较出发菌提高了3-4倍。