茯苓与灵芝原生质体融合育种条件优化研究

摘要

以PEG为融合剂原生质体融合技术为育种技术,研究茯苓与灵芝原生质体的融合育种条件,将灵芝的漆酶基因转入茯苓中,构建茯苓育种的漆酶转化体系。通过正交实验方法,对茯苓和灵芝菌种的原生质体制备、融合再生条件进行优化,筛选融合菌株并对其进行种属鉴定和漆酶活力测定,结果表明:茯苓原生质体制备和再生的最佳条件为2.5%溶壁酶、2 h和32℃,原生质体融合的最佳条件为25%PEG4000、pH8.5、35℃和20 min;经筛选获得了可使RB-PDA平板稳定变色的融合菌株,分子鉴定表明其主要具有茯苓的遗传性状,与灵芝的亲缘关系较远,但具备部分灵芝的遗传性状;漆酶活力测定表明亲本灵芝的产漆酶性状转移到了融合菌株中。