槐定碱抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症因子分泌及机制

摘要

目的观察槐定碱对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)时,对Toll样受体4(TLR4)、c-Jun表达的影响,探讨槐定碱抗LPS分子机制。方法培养RAW264.7细胞,实验分为4组:巨噬细胞对照组,以无血清DMEM孵育细胞;槐定碱处理组,以含31.25 mg/L槐定碱DMEM孵育细胞;LPS组及LPS刺激后槐定碱处理组,分别以浓度为100μg/L LPS DMEM孵育细胞60 min后弃去LPS,而后分别加入无血清DMEM或31.25 mg/L槐定碱DMEM继续培养。以上4组分别于处理完毕后5、30、60、120 min收集细胞及培养液。采用反转录PCR检测RAW264.7细胞TLR4、c-Jun mRNA的表达,Western blot法及免疫细胞化学技术检测RAW264.7细胞c-Jun蛋白的表达;ELISA检测培养液中TNF-α、IL-1β分泌量。结果槐定碱处理组与巨噬细胞对照组各指标间未见显著性差异;LPS组各时间点RAW264.7细胞的TLR4、c-Jun mRNA及c-Jun蛋白表达,培养液中TNF-α、IL-1β分泌量均显著高于巨噬细胞对照组,并维持至120 min未见下降;LPS刺激后槐定碱处理组显著抑制LPS刺激的RAW264.7细胞TLR4、c-Jun mRNA及c-Jun蛋白表达,并减少TNF-α、IL-1β分泌。结论槐定碱通过抑制TLR4及c-Jun表达,下调LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-α、IL-1β的分泌。