石胆酸诱导的LO2细胞胰岛素抵抗模型及其应用

摘要

目的利用石胆酸刺激人正常肝细胞(LO2)建立胰岛素抵抗模型,并用于筛选具有改善胰岛素抵抗降血糖活性的化合物。方法用不同浓度石胆酸(LCA)处理LO2细胞不同时间。通过MTT法检测细胞活性,并用不同浓度胰岛素刺激细胞,采用荧光标记2-脱氧葡萄糖(2-NBDG)作为光学探针检测细胞的葡萄糖摄取能力,明确建立稳定的LO2细胞胰岛素抵抗模型所需LCA的最适浓度及时间。Western blot检测LCA对胰岛素信号通路关键蛋白:磷酸化胰岛素受体底物1(p-IRS1)、胰岛素受体底物1(IRS1)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)和蛋白激酶B(AKT)表达的影响。模型建立后,以二甲双胍为阳性药,对5种黄酮类化合物奥卡宁、异奥卡宁、马里苷、黄诺马苷、紫铆因及1种环烯醚萜类化合物梓醇,进行改善胰岛素抵抗降血糖活性筛选,以2-NBDG荧光标记葡萄糖法评估细胞糖摄取情况,以MTT法评估细胞存活率。结果 LCA作用于LO2细胞可显著降低细胞糖吸收,并产生明显的胰岛素耐受,而25μmol·L^(-1) LCA作用于LO2细胞24 h,模型稳定性最好。与对照组相比,12.5和25μmol·L^(-1) LCA组IRS1的蛋白磷酸化水平显著降低(P <0.05),且12.5和50μmol·L^(-1) LCA能明显减少AKT蛋白的磷酸化水平(P <0.01)。活性筛选发现,奥卡宁、异奥卡宁及紫铆因均能显著提高细胞糖摄取能力,并且其改善细胞胰岛素抵抗降血糖活性显著优于阳性药二甲双胍。结论 LCA可诱导LO2细胞建立稳定、可靠的胰岛素抵抗模型并用于药物筛选。