GLP1R-GFP稳定转染Rin-m5F细胞系的构建

摘要

目的本研究目的是构建一种能稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)人胰高血糖素样肽-1受体(GLP1R)的胰岛细胞系,用来筛选GLP1R激动剂类药物。方法使用X-treme GENE HP DNA Transfection Reagent将pCMV6-AC-GLP1R-GFP质粒转染到Rin-m5F细胞,经G418筛选单克隆Rinm5F/GLP1R-GFP细胞并扩大培养。结果该细胞能稳定传代,荧光显微镜下观察细胞绿色荧光分布均匀,Western blot验证GLP1R蛋白表达显著增加。在实验验证中,对照空白组中细胞绿色荧光分布均匀,阴性药物格列本脲(非GLP1R靶点药物)作用时细胞内无明显荧光斑点出现,阳性药物百泌达作用(GLP1R激动剂类药物)时细胞内出现显著荧光斑点。结论 GLP1R激动剂类药物筛选模型Rin-m5F/GLP1R-GFP成功构建。该模型能对混合物样品进行筛选,具有假阳性极低、筛选所需样本小、筛选样品量大、易标准化、筛选速度快、特异性强等优势,为GLP1R激动剂类药物的筛选奠定了基础。