“逆向色谱-树脂联用法”追踪核桃的神经保护活性部位

摘要

目的采用"逆向色谱-树脂联用法"追踪核桃的神经保护活性部位。方法采用AB-8大孔吸附树脂,根据各个洗脱流分对H_2O_2诱导的PC12损伤模型的保护作用,确定其活性部位;采用Na NO_2-Al(NO_3)_3-NaOH法对其黄酮类成分进行测定,再采用高速逆流色谱进行第二步纯化,并进行黄酮含量测定;采用体外PC12损伤模型和体内动物模型验证其活性,并测定氧化应激相关的活性氧(reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSHPx)等指标。结果核桃粗提物经AB-8大孔吸附树脂富集后,50%洗脱流分的活性最好,黄酮的含量为52.7%,推测其活性成分可能是其黄酮类化合物。采用高速逆流色谱进一步纯化,黄酮含量能达到88.2%,且对H_2O_2诱导的PC12损伤模型有保护作用、减缓D-半乳糖(D-galactose,Dgal)诱导的小鼠的衰老,这可能与清除多余ROS、M DA,增加SOD、CAT、GSH-Px活力有关。结论核桃的黄酮类成分是其神经保护的药效物质,采用"逆向色谱-树脂联用法"能得到疗效更好、纯度更高的核桃黄酮类成分,为今后核桃的进一步开发利用提供数据支持。