猪圆环病毒3型和猪伪狂犬病病毒双重荧光定量PCR方法的建立和应用

摘要

根据猪圆环病毒3型和猪伪狂犬病病毒保守基因序列设计引物和探针,通过优化反应体系,建立了猪圆环病毒3型和猪伪狂犬病病毒双重荧光定量PCR检测方法,评估了该方法的特异性、敏感性及重复性。结果显示,该方法能特异性扩增猪圆环病毒3型和猪伪狂犬病病毒核酸,与猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒、日本脑炎病毒、猪圆环病毒1型、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪博卡病毒无交叉反应。猪圆环病毒3型和猪伪狂犬病病毒的最低检测限均为10 copies/μL;批内和批间重复性试验的变异系数均小于3%。用建立的双重荧光定量PCR方法对87份猪组织样品进行检测,结果显示,猪伪狂犬病病毒和猪圆环病毒3型的阳性率分别为17.24%和24.14%。上述结果表明,本研究建立的双重荧光定量PCR方法具有特异、敏感、稳定和快速的优点,可用于猪圆环病毒3型和猪伪狂犬病病毒鉴别诊断和流行病学调查。