TIG-Fc真核表达载体的构建及其对自然杀伤细胞功能的影响

摘要

cqvip:T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制性基序结构域[T-cell immunoglobulin and immunoreceptor tyrosinebased inhibitory motif(ITIM)domain,TIGIT]是一种新型的免疫抑制性受体,在机体的免疫调节网络中扮演着重要角色。为了进一步探究TIGIT对自然杀伤(natural killer,NK)细胞的免疫调节功能,构建了融合蛋白TIGIT胞外段(即TIGIT第1~135位氨基酸,以保留功能结构域Ig V区,此胞外段简称为TIG)-人免疫球蛋白G3(immunoglobulin G3,Ig G3)Fc段的真核表达载体,并对TIG-Fc融合蛋白的表达及其对NK-92细胞功能的影响进行了初步研究。利用分子生物学方法,将携带人TIG与人Ig G3 Fc段的基因融合,然后插入真核表达载体pc DNA3.1(-)中,以构建重组质粒pc DNA3.1(-)-TIGFc。随后将重组质粒转染至人胚肾细胞HEK-293T中,通过流式细胞仪和Western blot检测TIG-Fc融合蛋白在293T细胞中的表达;再将重组质粒转染至NK-92细胞中,通过WST-1检测TIG-Fc融合蛋白对NK-92细胞增殖的影响,并利用ELISA法检测TIG-Fc融合蛋白对NK-92细胞分泌IFN-γ的水平的影响。结果成功构建了人TIG与人Ig G3 Fc融合表达的真核表达载体,且TIG-Fc融合蛋白的表达能够显著抑制NK-92细胞的增殖和分泌IFN-γ的能力(P<0.05),为后期TIGIT的功能研究奠定了重要基础。