HPLC法检测几种α-酮酸化合物的柱前衍生化条件优化

摘要

目的 为了筛选柱前衍生-HPLC法测定α-酮酸化合物的最优衍生化条件.方法 采用紫外分光光度法检测α-酮酸标准品衍生化后的最大吸收波长.运用单因素试验,以柱前衍生-HPLC法所检测出的峰面积作为评价指标,对影响衍生化反应的因素(pH值、温度、加热时间、物质的量的比例)进行优化.结果 丁酮酸、丙酮酸钠、酮戊二酸单钾盐与衍生化试剂4-硝基-1,2-苯二胺(NPDA)反应所得的衍生化产物产生的紫外吸收最大波长约为260 nm.丁酮酸最佳衍生条件是pH=3、60℃、加热2h、衍生化试剂与其物质的量比为10∶1;丙酮酸钠最佳衍生条件是pH=3、80℃、加热1h、衍生化试剂与其物质的量比为10∶1;酮戊二酸单钾盐最佳衍生条件是pH=5、80℃、加热1h、衍生化试剂与其物质的量比为8∶1.同时对该方法的线性范围和精密度进行了考察.结论 本研究说明NPDA作为衍生化试剂与α-酮酸类化合物反应后,能够提高α-酮酸类化合物的检测灵敏度和准确性,为检测生物样品、药品、化妆品等中的α-酮酸类化合物提供参考.