腺病毒载体介导的bFGF基因体外转染大鼠平滑肌细胞的实验研究

摘要

目的 观察携带bFGF基因的重组腺病毒体外转染平滑肌细胞的效率及转染后目的基因的表达.方法 应用磷酸钙共沉淀法分别构建携带bFGF基因和大肠杆菌LacZ报道基因的重组腺病毒载体Ad.bFGF和Ad.LacZ,并以Ad.bFGF(组Ⅰ)、Ad.LacZ(组Ⅱ)、PBS(组Ⅲ,对照组)转染体外培养的大鼠平滑肌细胞(SMCs).X-gal染色检测腺病毒载体的转染效率,噻唑蓝(MTT)检测各组SMCs的增殖情况,酶联免疫吸附(ELISA)检测各组培养液中bFGF蛋白的浓度.结果 当MOI值为100时,X-gal核蓝染细胞比率达95%以上;组ⅠSMCs的增殖水平显著高于组Ⅱ和组Ⅲ(P＜0.01);ELISA方法检测,在转染后第1天组Ⅰ培养液中即有bFGF蛋白的分泌表达,第3天达峰值后分泌量逐渐下降,第8天仍能检测到少量分泌,而组Ⅱ和组Ⅲ培养液中均未检测到bFGF蛋白.结论 成功地将所构建的Ad.bFGF转染体外培养的SMCs,并在培养液中检测到目的基因的蛋白表达.