人趋化因子SLC在大肠杆菌中的表达与初步纯化

摘要

目的 确立人趋化因子SLC在大肠杆菌中的表达条件和初步纯化条件.方法 将pET32a(+)/SLC分别转化大肠杆菌AD494(DE3)、BL21trxB(DE3) 、BL21trxB(DE3)plusS,选择最佳宿主菌,优化诱导表达的条件,将大量表达的目的蛋白经金属离子亲和层析、除盐、肠激酶酶切、阳离子交换进行初步纯化.结果 pET32a(+)/SLC最佳宿主菌为BL21trxB(DE3),优化的表达条件为37℃、1mmol/L IPTG诱导3h,SDS-PAGE分析可见,表达蛋白的大小约为30kd,占菌体总蛋白的50%以上,可溶性蛋白约占50%.用SLC多克隆抗体进行Western blot分析显示,在30kd处出现单一阳性条带,而对照的pET32a(+)/BL21trxB(DE3)诱导菌则无此反应.SLC经一系列纯化步骤得到初步纯化.结论 初步建立pET32a(+)/SLC在宿主菌BL21trxB(DE3)中表达和纯化的方法.