HSP70腺相关病毒的制备、表达及纯化

摘要

目的 构建HSP70腺相关病毒载体,用于肾脏缺血预适应(ischemia preconditioning,IP)中HSP70的作用及机制研究.方法 利用已构建的转染真核表达重组质粒HSP70/pAAV-MCS,用磷酸钙转染法转染AAV-293细胞产生病毒颗粒,用氯仿- PEG8000/NaCl-氯仿的方法纯化病毒,用流式细胞仪检测病毒滴度.结果 AAV-293细胞产生表达绿色荧光蛋白病毒颗粒,经纯化,其获得滴度为2.2×106的病毒液,其感染活性能满足下一步体内外转染实验所需. 结论成功制备HSP70腺相关病毒并进行扩增及纯化,为下一步研究HSP70在肾脏缺血预适应中的作用及其机制打下基础.