hsa-miR-21-5p/ZNF367分子轴通过PI3K/Akt通路影响胃癌细胞的增殖和迁移

摘要

cqvip:目的探讨ZNF367通过PI3K/Akt通路抑制胃癌(GC)细胞的增殖和迁移,并初步探讨其作用分子机制。方法收集2015年8月–2018年10月上海市第八人民医院普外科手术切除的GC组织(非坏死部分)和相邻癌旁组织(距肿瘤组织>3 cm)标本46例,同时选取正常人胃黏膜上皮细胞GES1及GC细胞系MGC-803和MKN-45。采用qRT-PCR、Western blot实验检测ZNF367和hsa-miR-21-5p(mi R-21-5p)在组织和细胞系中的表达情况,进行Kaplan-Meier生存分析得出总生存期;利用脂质体LipofectamineTM 2000转染寡核苷酸片段mi RNA-NC、miR-21-5pmimic和miR-21-5pinhibitor至MGC-803细胞,通过CCK8法和划痕实验检测细胞的增殖和迁移能力;采用双荧光素酶报告载体系统验证ZNF367和miR-21-5p的作用靶点,采用qRT-PCR、 Westernblot实验检测miR-21-5pmimic和miR-21-5pinhibitor转染MGC-803细胞中ZNF367、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin以及PI3K/Akt通路中p-PI3K和p-Akt的表达情况。结果 ZNF367在胃癌组织和胃癌细胞系中的表达水平分别显著低于癌旁组织和GES-1细胞(P<0.01),且在MGC-803细胞中表达水平最低,而miR-21-5p的表达正相反;在MGC-803细胞中,OE-ZNF367和miR-21-5p inhibitor转染组的细胞增殖和迁移能力显著低于对照组,而si RNA-ZNF367和miR-21-5pmimic转染组的细胞增殖和迁移能力显著高于对照组;生物信息学和荧光素酶活性实验结果表明ZNF367与miR-21-5p具有直接靶向关系;qRT-PCR、Western blot实验结果表明在miR-21-5p inhibitor转染组中,E-cadherin的表达是显著提高的(P <0.01),而N-cadherin、Vimentin、p-PI3K和p-Akt的表达是显著下降的(P<0.01);在miR-21-5pmimic转染组中,结果相反(P <0.01)。结论 hsa-miR-21-5p/ZNF367分子轴通过调控PI3K/Akt通路抑制EMT过程,从而影响胃癌细胞MGC-803的增殖和迁移。