阪崎克罗诺菌特异性适配子筛选研究

摘要

目的通过SELEX(指数富集配基系统进化技术)筛选阪崎克罗诺菌特异性DNA适配子,为建立基于适配子技术的阪崎克罗诺菌快速检测方法奠定基础。方法在阪崎克罗诺菌比较基因组分析、蛋白亚细胞定位预测、蛋白跨膜区预测分析、基因mRNA表达量分析、基因克隆表达和蛋白纯化基础上,制备用于适配子筛选的靶蛋白。利用靶蛋白偶联羧基磁珠,筛选ssDNA适配子。并对适配子的靶蛋白结合亲和力和目标菌捕获特异性进行分析。结果适配子S1与靶蛋白结合亲和力较高,对阪崎克罗诺菌有较好捕获能力,捕获率最高为23.1%。对大肠埃希氏菌、沙门氏菌等非目标菌不具有明显的捕获能力,具有较好的阪崎克罗诺菌捕获特异性。结论适配子S1和S2的二级结构以茎环结构和发夹结构为主。