测定小鼠细胞因子的双抗体夹心ELISA法的建立及应用研究

摘要

目的建立敏感的测定小鼠IL-5、IL-4和IFN-γ水平的生物素-链霉亲和素双抗体夹心ELISA法,并探讨该法在IL-5转基因小鼠感染模型中的应用价值.方法含大鼠抗小鼠IL-4、IL-5和IFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞培养上清,经PM10膜超滤、50%饱和硫酸铵沉淀及Protein G-Sepharose亲和层析纯化.应用活化生物素制剂对纯化的TRFK4、BVD6和AN18单克隆体抗体进行生物素化.用纯化的2μg/ml TRFK5、8μg/ml 11B11和4μg/ml R4-6A2分别作为测定小鼠IL-5、IL-4和IFN-γ的包被抗体,然后逐步加入样品、生物素化TRFK4(1μg/ml)、BVD6(2μg/ml)和AN18(1μg/ml)、SA-HRPO和OPD,硫酸终止反应后读取A490值.结果所建立的生物素-链霉亲和素双抗体夹心ELISA法特异性和敏感性高,用于检测感染巴西日圆线虫感染的IL-5转基因小鼠和非转基因小鼠的血清标本取得了较好的效果.结论该ELISA方法对于测定小鼠细胞因子具有应用价值.