测定人血清载脂蛋白M双抗体夹心ELISA法的建立及其在2型糖尿病中的应用

摘要

目的：
　　 1建立一种检测人血清载脂蛋白M(apolipoprotein M，apoM)的双抗体夹心ELISA(enzyme linked immunosorbent assay)法。运用该方法检测健康人群血清apoM浓度，并建立apoM的正常参考值范围。
　　 2.应用该方法检测2型糖尿病患者血清apoM浓度，初步探讨apoM在2型糖尿病患者血清中的变化趋势，以便进一步了解apoM对2型糖尿病并发动脉粥样硬化相关疾病的作用。
　　 方法：
　　 1.用抗apoM单克隆抗体作包被抗体，辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase，HRP)标记的抗apo M单克隆抗体作酶标记抗体，建立检测apoM的双抗体夹心ELISA法，并通过一系列方法学试验对该方法进行评价。
　　 2.测定483例健康人群血清apoM浓度，建立apoM的正常参考值范围。
　　 3.用该方法检测117例2型糖尿病患者和111例对照组血清apoM浓度，比较两组血清apoM、超敏C反应蛋(high sensitivity C reactiveprotein，hs-CRP)、血脂水平，分析两组血清apoM水平和各项指标的相关性。
　　 结果：
　　 1.本ELISA法检测人血清apoM的线性范围为31.25ng/mL～500ng/mL；最低检测限为23.92ng/mL；脂蛋白(a)(Lp(a))、载脂蛋白A1(apolipoproteinAI，apo A1)和载脂蛋白B(apolipoprotein B，apo B)对apo M检测结果干扰作用小；批内、批间变异均<10％。
　　 2.apoM女性正常参考值为22.55±11.60μ g/mL，男性正常参考值为21.44±12.71μg/mL，健康人群的正常参考值范围为22.06±12.10μ g/mL；健康人群血清apoM水平与甘油三酯(totaltriglycerides，TG)呈负相关(r=-0.186，p<0.05)，但与总胆固醇(totalcholesterol，TC)(r=0.106，p<0.05)和高密度脂蛋白胆固醇(high-densitylipoprotein cholesterol，HDL-C)(r=0.395，p<0.01)呈正相关，差异有统计学意义。
　　 3.2型糖尿病患者血清apoM水平(23.36±13.55μ g/mL)低于对照组(26.86±10.40μ g/mL)，差异有统计学意义(p<0.05)；糖尿病组血清apoM水平与TC呈正相关(r=0.235，p<0.05)，与HDL-C呈正相关(r=0.183，p<0.05)，与hs-CRP呈负相关(r=-0.185，p<0.05)。
　　 结论：
　　 1.本研究建立了一种定量检测人血清apoM浓度的双抗体夹心ELISA法，该方法具有较好的敏感性和特异性；确定了该方法检测人血清apoM浓度的正常参考值范围。
　　 2.2型糖尿病患者血清apoM浓度降低；apoM水平与TC、HDL-C呈正相关，与hs-CRP呈负相关，提示apoM可能参与体内胆固醇、HDL代谢，可能参与体内炎症反应，抑制hs-CRP等炎症因子的释放，发挥抗动脉粥样硬化的作用；进一步提示2型糖尿病患者血清apoM浓度降低对其并发动脉粥样硬化疾病可能有预示作用。