弓形虫表面抗原SAG2基因片段的克隆与原核表达

摘要

目的扩增弓形虫主要表面抗原(SAG2)编码基因片段并进行重组表达.方法设计合成1对引物,从弓形虫基因组DNA中扩增SAG2基因序列,以低熔点琼脂糖回收纯化,并以限制性内切酶BamHⅠ和SalⅠ进行双酶切、纯化后,再插入表达载体pGEX-4T-2,经PCR和双酶切筛选,测序验证后,在大肠杆菌中进行表达,并用SDS-PAGE和Westem blot鉴定.结果从弓形虫核酸提取物中扩增出约477bp的SAG2基因,构建成功了重组质粒pGEX-4T-2-SAG2;SAG2基因在大肠杆菌中得到高效表达.SDS-PAGE电泳pGEX-4T-2-SAG2的融合蛋白条带的分子量约为42kD,Westen-blot显示融合蛋白能被兔抗弓形虫血清识别.结论GST融合表达载体的构建和SAG2基因片段成功表达,为进一步为SAG2重组疫苗及重组诊断抗原的研制奠定了基础.