弓形虫表面抗原SAG3基因片段克隆及序列测定

摘要

目的克隆弓形虫ZS2及RH株SAG3表面抗原基因片段,并进行序列分析.方法设计合成引物,从弓形虫ZS2、RH及ZS1株基因组DNA中分别特异扩增出编码SAG3抗原的基因片段.扩增的目的片段经纯化后用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后,克隆到原核表达质粒pGEX-4T-2中,转化入大肠杆菌JM109,用PCR初筛,将PCR扩增阳性的重组子用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切鉴定,并进行序列的测定.结果从弓形虫ZS2、RH和ZS1株DNA中扩增出1176bp的SAG3基因,构建重组质粒pGEX-4T-2-SAG3(pGEX-SAG3),酶切产物的大小分别与预期相符.结论成功地对弓形虫ZS2、RH和ZS1株SAG3基因进行体外扩增及构建原核表达重组质粒pGEX-SAG3,并经酶切及序列分析所验证,为弓形虫SAG3表面抗原的表达、体外诊断研究做好准备.