弓形虫膜表面抗原2（SAG2）的表达、纯化、鉴定与DNA疫苗的研究

摘要

目的:构建含弓形虫膜表面抗原2基因(SAG2)的原核表达质粒pGEX-SAG2和pET-SAG2,在大肠杆菌中以两种形式表达的表达SAG2蛋白并纯化;研究表达产物的免疫学活性.构建弓形虫膜表面抗原2基因的DNA疫苗pVAC-SAG2,以此疫苗免疫BABL/c小鼠,观察其抗弓形虫感染的免疫保护作用.为探索新型的弓形虫疫苗以及弓形虫病的免疫预防提供理论及实验依据.结论:成功构建含弓形虫膜表面抗原SAG2基因的原核表达质粒pGEX-SAG2、pET-SAG2.SAG2基因通过两种载体在大肠杆菌中获高效表达,表达产物具有良好的免疫原性.成功构成弓形虫的DNA疫苗pVAC-SAG2,此疫苗能诱导BABL/c小鼠产生细胞免疫和体液免疫,对弓形虫的攻击感染具有一定的免疫保护作用.

目录

摘要

Abstract

前言

1材料与方法

1.1材料

1.2实验方法

1.2.1弓形虫虫体的培养

1.2.2虫体的保存

1.2.3弓形虫基因组DNA的提取

1.2.4 SAG2基因在大肠杆菌中的表达

1.2.5弓形虫DNA疫苗pVAC-SAG2的构建

2实验结果

2.1 SAG2在大肠杆菌中的表达

2.1.1SAG2基因的PDR扩增

2.1.2重组质粒PMD-SAG2的鉴定

2.1.3重组表达质粒Pgex-SAG2酶切鉴定

2.1.4重组融合蛋白SAG2-GST在大肠杆菌的诱导表达

2.1.5重组融合蛋白SAG2-GST的纯化

2.1.6重组融合蚩白SAG2-GST的Western blot分析

2.1.8表达质粒pET-SAG2的双酶切鉴定

2.1.9非融合蛋白SAG2的表达

2.1.10非融合型SAG2蛋白的纯化

2.1.11非融合型SAG2蛋白的Western blot鉴定

2.2 DNA疫苗pVAC-SAG2(VAC)的构建

2.2.1 SAG2(VAC)基因的扩增

2.2.2克隆载体PMD-SAG2(VAC)鉴定

2.2.3表达质粒pVAC-SAG2的鉴定

2.2.4 DNA疫苗pVAC-SAG2(VAC)对小鼠的免疫保护作用

2.3DNA疫苗Pvac-SAG2(VAC)对小鼠的免疫保护作用

2.3.1弓形虫DNA疫苗pVAC-SAG2对小鼠脾淋巴转化功能的影响

2.3.2弓形虫D№疫苗pVAC-SAG2对疫小鼠T淋巴细胞亚群的影响

2.3.3弓形虫DNA疫苗pVAC-SAG2对疫小鼠血清抗体滴度的影响

2.3.4弓形虫DNA疫苗pVAC-SAG2对免疫小鼠的抗感染作用

2.4实验图片

3讨论

3.1 SAG2在大肠杆菌中的表达与纯化

3.2 pVAC-SAG2 DNA疫苗的免疫保护作用

参考文献

附录

综述

致谢