汉滩病毒S、M基因部分片段嵌合基因原核载体的构建及表达产物的鉴定

摘要

目的将汉滩病毒核蛋白(NP)主要抗原位点活性片段与囊膜糖蛋白G2进行融合原核表达及鉴定,为该融合蛋白的真核表达及汉滩病毒基因工程疫苗研究打基础.方法构建了汉滩病毒76-118株M基因G2片段与S基因5'端700bp片段的嵌合片段原核表达载体pGEX-4T1-G2S0.7,诱导表达相应的融合蛋白,用Western blotting和ELISA方法进行鉴定.结果酶切结果显示成功构建了原核表达载体pGEX-4T1-G2S0.7.IPTG诱导表达4h后,Western blotting显示诱导出分子量约100kD的含GST的融合蛋白(GST-G2N0.7).ELISA结果表明该融合蛋白与抗汉坦病毒NP特异性McAb有较高的结合活性(P/N值为0.71/0.07),与抗汉滩病毒糖蛋白特异性McAb也有较弱的结合活性(P/N值为0.21/0.08).结论 S、M基因拼接方式是成功的,能够表达出有活性的汉滩病毒G2糖蛋白与NP片段的融合蛋白.