结核分枝杆菌Ag85B-MPT64融合基因的构建及其在大肠杆菌中的表达

摘要

目的构建结核分枝杆菌早期分泌蛋白Ag85B和MPT64融合基因(AM)及其原核表达质粒并进行表达.方法采用gene SOEing法将 ag85b和mpt64用疏水甘氨酸接头(Gly4Ser)3融合,经限制性内切酶切后克隆入原核表达载体pET32a中,进行酶切、PCR鉴定和DNA序列测定.将重组质粒转染Ecoli.BL21,经过IPTG诱导后其表达产物进行SDS-PAGE和免疫印迹分析.结果 AM融合基因定向克隆入pET32a中,双向测序验证碱基突变率为0.11%(2/1707),均为无意义突变.SDS-PAGE和免疫印迹分析结果均显示在约73kDa的位置可见明显的蛋白条带.结论成功地构建了ag85b-mpt64融合基因及其原核表达质粒,重组质粒能够在大肠杆菌在中表达.