绵羊ARQ基因型PrP前体蛋白基因的克隆及原核表达

摘要

目的构建ARQ基因型PrP前体蛋白基因原核表达重组质粒,为TSE的检测及诊断、PrP的结构与功能研究奠定基础.方法根据GenBank中绵羊PrP基因全序列和表达载体pET28a载体的多克隆位点设计了绵羊PrP前体蛋白基因引物,以绵羊基因组DNA为模板,PCR扩增绵羊PrP前体蛋白基因,通过酶切将些基因克隆到pET28a(+)载体中,构建了重组原核表达质粒pET-OPrP.重组质粒转化 E.coli BL-21感受态细胞,用IPTG诱导表达,通过PAGE电泳和Western-bloting鉴定表达的重组蛋白.结果在pET28a(+)载体中成功克隆了PrP前体蛋白基因,并在 E.coli 中成功表达了重组的PrP前体蛋白.结论绵羊PrP前体蛋白基因可以在 E.coli 中表达.本次克隆得到的小尾寒羊的PrP基因型为ARQ.