金黄色葡萄球菌β-溶血素的原核表达及其溶血活性检测

摘要

目的 为进一步研究金黄色葡萄球菌β-溶血素的致病性及免疫保护作用,对金黄色葡萄球菌β-溶血素进行了表达.方法 应用聚合酶链式反应(PCR)技术,从金黄色葡萄球菌中扩增出β-溶血素基因,将该基因克隆到原核表达载体PET-32a中,获得重组质粒PET-32a-β,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达.对表达产物进行SDS-PAGE电泳和Western blot检测分析,并对纯化后表达产物进行平板溶血试验,检测其溶血活性.结果 PCR扩增的β-溶血素基因片段全长为982bp;表达的β-溶血素重组蛋白大小为57kD;纯化的重组蛋白可使绵羊红细胞发生明显溶血.结论 结果表明所克隆的β-溶血素基因在大肠杆菌中得到了良好的表达,并保持良好的溶血活性.