肝螺杆菌多重PCR检测方法的建立及应用

摘要

目的 建立肝螺杆菌的多重PCR检测方法,对中国动物肝螺杆菌进行检测.方法 以毒力基因fla B基因、ure A基因和cdt B基因和cdt C基因作为靶基因,建立检测肝螺杆菌的多重PCR方法.对肝螺杆菌、空肠弯曲菌、幽门螺杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、小肠结肠炎耶尔森菌、大肠埃希氏菌和铜绿假单胞杆菌抽提的DNA进行多重PCR扩增.应用本研究建立的多重PCR检测方法对482只动物(其中:海南30只猴、江苏34只小鼠和北京32只猴、30头猪、66只犬、13只兔、29只豚鼠、69只大鼠、213只小鼠)进行检测,对扩增出的阳性结果进行测序.同时,对所有样本采用选择性培养基进行肝螺杆菌培养以作对照.结果 肝螺杆菌能扩增出各自的特异性条带,而其他参考菌株均未扩增出条带,这表明该方法具有较强的特异性.482份样本中检出43份肝螺杆菌阳性样本,阳性率8.92 % (43 / 482),其中:2只犬(3.03 %,2 / 66)、1只兔(7.69 %,1 / 13)、5只大鼠(7.25 %,5 / 69)和35只小鼠(16.43 %,35 / 247)均扩增出肝螺杆菌毒力基因片段.结果 显示,肝螺杆菌fla B基因、ure A基因和cdt B基因和cdt C基因序列与GenBank中的肝螺杆菌ATCC 51449的相应基因序列核苷酸同源性高达99 %.用选择性培养基能培养出肝螺杆菌.结论 中国动物中的犬、兔、大鼠和小鼠均能检出肝螺杆菌fla B基因、ure A基因、cdt B基因和cdt C基因.建立的多重PCR检测方法可作为肝螺杆菌大规模检测的新技术,这为在中国开展肝螺杆菌流行病学调查提供了有效科学工具.