西尼罗病毒荧光RT-PCR检测方法的建立

摘要

目的 用TaqMan技术建立荧光RT-PCR方法 ,用于检测西尼罗病毒(WNV).方法 从GenBank上调取WNV的基因序列,设计WNYA、WNYB、WNYC三套荧光RT-PCR,经优化后用于WNV灭活苗、乙型脑炎病毒(JEV)、黄热病毒(YFV)等11种病毒核酸的检测,同时用10倍倍比稀释的双链DNA、质粒DNA、cDNA、RNA进行扩增,以检测其灵敏度.结果 建立的WNYA、WNYC荧光RT-PCR检出WNV灭活苗阳性,而JEV等10种非WNV病毒均为阴性,能检出30个拷贝和65个拷贝的双链DNA、420个拷贝和460个拷贝的质粒DNA;WNYB的反转录效率明显低于WNYA和WNYC.结论 建立的WNYA、WNYC荧光RT-PCR可作为检测WNV的技术储备.