细粒棘球绦虫转基因植物载体重组pBI-Eg95-EgA31质粒构建及鉴定

摘要

目的 构建并鉴定细粒棘球绦虫转基因植物载体重组pBI-Eg95-EgA31质粒.方法 从细粒棘球蚴包囊中分离原头节,超声粉碎后抽提总RNA为模板,采用RT-PCR方法分别扩增Eg95和EgA31编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)扩增Eg95-EgA31融合基因;将该融合基因定向克隆到植物表达载体pBI121中构建pBI-Eg95-EgA31重组质粒;电穿孔转化根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,At)LBA4404株,抽提质粒进行酶切及PCR鉴定.结果 电泳及测序证实1 016bp Eg95-EgA31融合基因克隆成功.经酶切及PCR证实重组质粒pBI-Eg95-EgA31成功转入根癌农杆菌.结论 成功构建了细粒棘球绦虫转基因植物载体重组pBI-Eg95-EgA31质粒,为进一步构建细粒棘球绦虫转基因植物疫苗奠定了基础.