肠道病毒71型(EV71)感染性克隆的构建

摘要

目的 构建肠道病毒71(enterovrius 71,EV71)的感染性克隆,为研究EV71毒力基因及新型疫苗设计等建立一个技术平台.方法 用RT-PCR 方法扩增出EV71 FJ08149株全基因组,通过TA克隆组装进TOPO-XL-PCR 载体中,获得全长cDNA 克隆pFJ08149T5和pFJ08149T25.应用T7聚合酶系统在体外将线性化后全长cDNA克隆转录出RNA并转染RD细胞.通过间接免疫荧光试验、RT-PCR、序列测定及免疫电镜等对拯救病毒进行鉴定.结果 RNA转染后72 h观察到典型的肠道病毒致细胞病变,拯救病毒经RT-PCR、间接免疫荧光和免疫电镜检测鉴定为EV71型,表明已成功构建了EV71感染性克隆.结论 本研究成功构建出具有感染性的EV71全长cDNA克隆,为深入研究EV71的致病机制等提供了有利的工具.