优化密码子以提高狂犬病病毒糖蛋白基因在原核细胞的表达

摘要

目的 探讨提高狂犬病病毒(RV)HEP-Flury株糖蛋白(GP)基因在原核细胞中表达的水平和与抗体的反应水平.方法 以RV HEP-Flury株的全长质粒为模板,采用PCR方法扩增获得去除信号肽基因的GP(G1)、GP的膜外区基因(G2).选取膜外区基因中抗原表位富集区基因,对氨基酸密码子进行修饰并合成其序列(G3).分别将G1、G2及G3基因亚克隆到表达载体pET32a(+),构建融合表达质粒pET32a-G1、pET32a-G2及pET32a-G3,转化表达宿主菌BL21,并利用IPTG诱导表达.经SDS-PAGE,Western-blotting和薄层扫描分析,比较重组蛋白的表达量.结果 G3基因的表达量比G1、G2基因明显提高.结论 通过密码子优化,能显著提高G基因在原核细胞中的表达水平.