基因修饰

摘要： 神经干细胞具备自我更新能力,可在特定环境下定向分化为神经元和胶质细胞,通过分泌神经营养因子、调控神经炎症、增强神经元可塑性等机制修复帕金森病(PD)多巴胺神经元损伤。目前PD治疗主要是多巴胺替代治疗,但不能阻止PD病情进展,且不能彻底根治。干细胞在PD中具有较好的治疗前景,尤其神经干细胞优势引起较多关注。尽管神经干细胞移植在PD治疗中取得了一定的效果,但临床中的应用仍受到很多条件限制。本文就神经干细胞基因修饰在PD治疗中的研究进展进行综述,旨在探讨神经干细胞治疗PD的关键调控机制。

摘要： 害虫抗药性的发生发展和高风险杀虫剂的相继限用禁用致使市场上实际可用杀虫剂减少。作为源自蜘蛛毒肽的新型生物杀虫剂,GS-ω/κ-HXTX-Hv1a有望为持续有效的害虫治理提供新工具,其成功开发和应用有力证实了多肽可直接作为农药进行商业化。GS-ω/κ-HXTX-Hv1a具有经济实用的生产成本、独特的抑制剂胱氨酸结基序、协同的双重作用机制、全新的作用靶标位点、广谱的生物活性以及优异的安全性等特点,兼具化学杀虫剂的有效性和生物制品的低风险性,在害虫绿色防控、昆虫病原体改良、转基因作物开发和新农药创制等方面的应用前景广阔。从研发背景、通用名、序列结构、作用机制、生物活性、安全性和应用前景等方面对GS-ω/κ-HXTX-Hv1a研究开发与应用的进展情况进行总结,为GS-ω/κ-HXTX-Hv1a及同类蜘蛛毒肽品种在害虫防控上的研究、开发和应用提供参考和支持。

摘要： 目的探究基因修饰间充质干细胞(MSCS-CD)联合肝动脉化疗栓塞术(TACE)对中晚期原发性肝癌患者的近期疗效及血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法选择2018年3月~2020年3月于我院接受治疗的60例中晚期原发性肝癌患者为研究对象,将其随机分为研究组(n=30,接受MSCS-CD+TACE治疗)与对照组(n=30,单纯接受TACE治疗),对两组患者均随访24个月,记录患者生活质量、VEGF水平及肿瘤反应情况,对比两组患者临床疗效及不良反应发生率。结果研究组患者的ORR和DCR均明显高于对照组(P0.05)。结论对中晚期原发性肝癌患者应用MSCS-CD+TACE能够显著提高临床疗效,延长患者PFS和生存时间,改善患者生活质量。

摘要： 器官短缺是制约器官移植发展的重要因素,而异种器官移植是解决器官移植短缺的有效途径。猪作为异种器官移植研究的最佳供体动物已得到广泛认可,但要实现猪异种器官移植的临床应用需要克服多重免疫排斥反应。基因修饰猪的改造,为解决免疫排斥反应实现异种器官移植提供了理论支撑。本文以免疫排斥反应发生的时间先后为顺序,依次对基因修饰猪在克服超急性排斥反应、急性血管排斥反应、细胞排斥反应和慢性排斥反应的研究进展进行了综述。

摘要： 供肝短缺是目前影响肝移植发展的最大难题。以2-1,3-牛乳糖苷转移酶基因敲除小型猪为供体的肝移植,在非人灵长类动物体内最长存活近1个月,已初步具备进入临床试验的条件。综合异种肝移植特点及临床现实情况,将异种肝移植作为暴发性肝功能衰竭的“桥接移植”可能是目前异种肝移植进入临床的最佳切入点。本文试就异种肝移植的发展历程、目前的研究进展以及未来临床试验受体选择的标准进行综述和分析,希望对未来的临床异种移植研究提供参考。

摘要： 背景:骨关节炎是以软骨退变损伤为主要病理改变的一种中老年人常见慢性疾病,早期骨关节炎可采用理疗、药物等治疗方式,中晚期可以选择手术治疗,但是总体治疗效果欠佳.目的:综述国内外基因编辑技术对骨关节炎基因研究的最新进展.方法:以"Gene editing,Osteoarthritis,The CRISPR/Cas9 technology,Gene therapy,Stem cells""基因编辑、骨关节炎、CRISPR/Cas9技术、基因治疗、干细胞"为检索词,检索2000至2020年PubMed、CNKI中国期刊全文数据库及万方数据库中收录的骨关节炎基因治疗和基因编辑技术相关文献,进行总结分析.结果与结论:①多种细胞生长因子和调控因子有益于促进软骨基质的合成和减轻关节炎症,为基因靶向修饰提供了种子来源;②基因编辑技术可以通过先天胚胎基因修饰,或将生物药剂释放到特定的解剖学靶点,利用口服、手术、局部外用及关节注射等方式进行目的基因导入机体发挥基因治疗作用;③关于骨关节炎疾病基因的修饰和应用策略有了新的进展;④基因编辑在应用上有了新方向,但是对骨关节炎疾病基因进行基因修饰的组织工程领域研究,在未来还需要更多的动物实验和临床试验.

摘要： 背景:以间充质干细胞为基础的细胞疗法蓬勃发展,在治疗难愈性创面方面具有很大的前景优势.目的:综述提高间充质干细胞治疗难愈性创面疗效的策略,以期为临床治疗难愈性创面提供理论依据.方法:检索万方、CNKI、PubMed、Web of Science等数据库2002年3月至2020年3月期间关于间充质干细胞应用于难愈性创面的文献,检索词分别为"间充质干细胞,难愈性创面(慢性难愈性创面),创面修复,组织再生"和"mesenchymal stem cells,nonhealing chronic wound,wound repair,tissue regeneration".排除陈旧以及重复的观点,将检索到的文献进行整理,共纳入64篇文献来进行分析.结果与结论:①梳理了难愈性创面的形成机制;②总结了间充质干细胞治疗难愈性创面的分子机制,例如直接分化、旁分泌、免疫调节、动员创面基底干细胞参与创面修复等;③总结了提高间充质干细胞对难愈性创面疗效的策略,例如基因修饰、预处理等;④上述研究为提高间充质干细胞治疗难愈性创面疗效提供了理论依据.

摘要： 背景:以间充质干细胞为基础的细胞疗法蓬勃发展,在治疗难愈性创面方面具有很大的前景优势。目的:综述提高间充质干细胞治疗难愈性创面疗效的策略,以期为临床治疗难愈性创面提供理论依据。方法:检索万方、CNKI、PubMed、Web of Science等数据库2002年3月至2020年3月期间关于间充质干细胞应用于难愈性创面的文献,检索词分别为“间充质干细胞,难愈性创面(慢性难愈性创面),创面修复,组织再生”和“mesenchymal stem cells,nonhealing chronic wound,wound repair,tissue regeneration”。排除陈旧以及重复的观点,将检索到的文献进行整理,共纳入64篇文献来进行分析。结果与结论:①梳理了难愈性创面的形成机制;②总结了间充质干细胞治疗难愈性创面的分子机制,例如直接分化、旁分泌、免疫调节、动员创面基底干细胞参与创面修复等;③总结了提高间充质干细胞对难愈性创面疗效的策略,例如基因修饰、预处理等;④上述研究为提高间充质干细胞治疗难愈性创面疗效提供了理论依据。

摘要： 背景:骨关节炎是以软骨退变损伤为主要病理改变的一种中老年人常见慢性疾病,早期骨关节炎可采用理疗、药物等治疗方式,中晚期可以选择手术治疗,但是总体治疗效果欠佳。目的:综述国内外基因编辑技术对骨关节炎基因研究的最新进展。方法:以“Gene editing,Osteoarthritis,The CRISPR/Cas9 technology,Gene therapy,Stem cells”“基因编辑、骨关节炎、CRISPR/Cas9技术、基因治疗、干细胞”为检索词,检索2000至2020年PubMed、CNKI中国期刊全文数据库及万方数据库中收录的骨关节炎基因治疗和基因编辑技术相关文献,进行总结分析。结果与结论:①多种细胞生长因子和调控因子有益于促进软骨基质的合成和减轻关节炎症,为基因靶向修饰提供了种子来源;②基因编辑技术可以通过先天胚胎基因修饰,或将生物药剂释放到特定的解剖学靶点,利用口服、手术、局部外用及关节注射等方式进行目的基因导入机体发挥基因治疗作用;③关于骨关节炎疾病基因的修饰和应用策略有了新的进展;④基因编辑在应用上有了新方向,但是对骨关节炎疾病基因进行基因修饰的组织工程领域研究,在未来还需要更多的动物实验和临床试验。

摘要： 急性呼吸窘迫综合征是呼吸系统常见危重症,临床治疗主要依靠机械通气和液体管理,缺乏有效的治疗措施。近年来,间充质干细胞用于治疗急性呼吸窘迫综合征的研究成为热点。本文将从归巢分化、分泌功能、炎性因子调节、巨噬细胞极化、基因修饰优化五个层面介绍间充质干细胞治疗急性呼吸窘迫综合征的可能机制和相关研究进展,并扼要地介绍该新兴治疗策略的发展趋势及临床应用前景。

摘要： 体外受精-胚胎移植是辅助生殖的基本技术之一,广泛应用于基因修饰小鼠的构建、精子及胚胎冷冻、小鼠生物净化等工作中.在以往的工作的基础上,研究了转基因与基因敲除这两种基因修饰类型的小鼠进行体外受精-胚胎移植时生仔率是否有差异.

摘要： HSC是人类发现最早的一种干细胞，也是目前研究最多的一种干细胞，已广泛应用于白血病的治疗、肿瘤病患者化疗后造血功能重建、遗传病以及肿瘤的基因治疗。目前，临床上采用脐带血移植治疗的疾病已经达到80余种，治疗的患者(包括儿童、成人)全世界已超过6000例，特别是近几年，人们将造血干细胞与基因治疗技术结合，为实体肿瘤的治疗开辟了新的道路。但由于目前理论和技术尚不够成熟，许多问题还需进一步完善和解决。如肿瘤是一个多基因，多因素导致的疾病，单一环节的干预，效果往往不够理想;基因修饰的造血干细胞介导的肿瘤治疗刚刚起步，实验结果并不尽如人意等，但医学科研是一个循序渐进的过程，有理由相信，随着相关研究的不断深入，在确保安全的基础上，加快实验研究成果向临床的过渡，基因修饰的造血干细胞介导的肿瘤治疗走向临床指日可待。

摘要： 目的:净化受微生物感染的基因修饰小鼠.方法:通过获取基因修饰小鼠的2-细胞期胚胎,将胚胎充分清洗并移植入假孕小鼠的输卵管中.结果:产仔率为39.8％,通过对新生鼠和假孕雌鼠进行微生物检测,所有指标均符合SPF级要求.结论:采用胚胎移植技术可有效净化受感染的小鼠种群.

摘要： 目前基因修饰水平的的趋于成熟为非人灵长类转基因动物制作创造了很多机遇，转基因狨猴因生物学特性、饲养成本、繁殖效率等方面的特定优势为干预和治疗人类疾病的的发展奠定了良好的基础。当然，也存在这不足之处。例如:一是，狨猴辅助生殖技术的很多细节仍不成熟，如卵母细胞及胚胎的冻存复苏，胚胎的体外培养和移植效率等，使得研究者在获得转基因狨猴前需要很多的供体和受体猴，无形中加大了实验成本，增加了基因修饰狨猴研究的开展和普及难度，限制了基因修饰狨猴的研究发展。二是，目前狨猴转基因技术主要存在日本/美国等国家，国内对狨猴尤其是转基因狨猴的研究仍处在初步阶段，很多研究技术和方法仍需进一步验证和摸索，研究工作任重而道远。三是，由于具有生殖能力的胚胎干细胞和体细胞核移植尚未广泛应用在非人灵长类动物上，狨猴的转基因技术仍局限在慢病毒介导的方法上，外源基因的随机插入不能从根本上达到精确基因修饰效果，需要进一步研究和完善基因修饰方法。四是，据以往的报告，狨猴的胚胎成功移植率并不高，因此整个狨猴的ART各个环节，均有待进一步研究，提高。

摘要： 本研究旨在构建过表达Foxp3和A20miRNA修饰Treg的DSL6A/C1细胞与树突状细胞的融合疫苗,获得既有DC特殊功能又表达肿瘤抗原的新型肿瘤疫苗.检测融合疫苗中Foxp3和A20基因及蛋白表达情况,体外分析融合疫苗的活性、CTL杀伤力以及抗体分泌能力,初步探讨疫苗抗胰腺肿瘤的免疫效应,为进一步将双基因修饰的肿瘤疫苗用于胰腺癌的防治研究奠定理论基础,有望开出发新的、高效特异的胰腺癌生物治疗药物.

摘要： 目的:本研究选择可视化毛色表型作为观察指标,应用CRISPR/Cas9技术敲除C57BL/6J小鼠酪氨酸酶基因(Tyrosinase gene,Tyr)致其黑色素合成障碍以制备白化表型小鼠,快速熟练掌握CRISPR/Cas9技术. 方法:分别从质粒pX330-Cas9、pX330-Tyr4a和pX330-Tyr4b PCR扩增Cas9和sgRNA体外转录用模板,接着体外转录出Cas9mRNA和sgRNA,最后Cas9mRNA和sgRNA共注射入C57BL/6J小鼠受精卵的胞质内,以制备TYR基因敲除小鼠. 结果:胞质内共注射后,共移植255枚受精卵至9只假孕母鼠.获得子代小鼠20只,其中4只毛色为白色,7只毛色为黑白相间,9只毛色为黑色. 结论:本研究成功制备了白化小鼠,预示已初步掌握CRISPR/Cas9技术,这为利用CRISPR/Cas9技术制备其它基因修饰动物(如小型猪)奠定了坚实基础.

摘要： 目的：探讨过表达肝细胞生长因子的人脐带间充质干细胞对鼻黏膜上皮和兔鼻窦黏膜机械损伤模型的修复作用。rn 方法:通过酶消化法和组织块培养法分离hUC-MSCs，胰酶消化1:3传代扩增。使用腺病毒载体构建了含有HGF基因的重组腺病毒(Ad-HGF)，以MOI=100转染hUCMSCs(HGF-MSCs),PCR以及ELISA鉴定HGF在HGF-MSCs中的表达;体外原代培养鼻上皮细胞，建立鼻茹膜上皮机械划痕模型，利用hUCMSCs以及HGF-MSCs的条件培养液观察对上皮愈合能力的影响，并采用CCK-8法检测其能否促进上皮细胞增殖。建立兔上领窦茹膜机械损伤模型。rn 结果：两种方法均能获得足量原代hUC-MSCs，并且符合国际干细胞协会标准。hUCMSCs条件培养液可促进鼻上皮细胞增殖、划痕愈合，通过过表达HGF能够增强这种效应。在HGF-MSCs组中，其胶原沉积明显下降，并且能够降低TGF-betal在损伤组织中的浓度。rn 结论:成功从人脐带中分离培养hUC-MSCs，并且符合国际标准;hUC-MSCs能在体外促进鼻茹膜上皮增殖、划痕愈合，体内移植能促进茹膜的愈合，部分能分化为上皮和纤毛细胞。HGF-MSCs不仅具有增强以上效应还能降低组织修复时胶原沉积以及纤维化程度。

摘要： 以嵌合型抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)为基础的细胞免疫治疗是一种新的治疗恶性肿瘤的模式,为部分晚期实体癌患者带来治愈的希望.尽管人体本身的T细胞对肿瘤也具有微弱的杀伤作用，然而癌症最终的发生还是说明T细胞失去识别癌细胞及相龚量癌细胞的能力。因此提高T细胞受体的识别能力尤为重要。设计出新的、能够在实体瘤微环境中存在和增殖的CAR-T细胞，比较不同基因修饰策略改造的CAR-T细胞的临床研究有利于优化CAR-T细胞治疗，使其治疗实体瘤从希望变为现实。目前小动物临床还未有相关文献研究，但根据人医临床来看发展前景十分宽广。

摘要： 探讨α-1,6岩藻糖基转移酶(α1,6-fucosyltransferase8,FUT8)对嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PAN)致小鼠足细胞损伤的影响.研究表明:1.核心岩藻糖基化修饰参与了嘌呤霉素氨基核苷诱导的小鼠足细胞凋亡和结构蛋白的改变。2.应用RNA干扰技术沉默FUT8基因，阻断足细胞的核心岩藻糖基化修饰，能在一定程度上抑制嘌呤霉素氨基核苷诱导的小鼠足细胞损伤。

摘要： 探讨α-1,6岩藻糖基转移酶(α1,6-fucosyltransferase8,FUT8)对嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PAN)致小鼠足细胞损伤的影响.研究表明:1.核心岩藻糖基化修饰参与了嘌呤霉素氨基核苷诱导的小鼠足细胞凋亡和结构蛋白的改变。2.应用RNA干扰技术沉默FUT8基因，阻断足细胞的核心岩藻糖基化修饰，能在一定程度上抑制嘌呤霉素氨基核苷诱导的小鼠足细胞损伤。

摘要： 本发明提供了控制同一靶基因在宿主中以不同剂量进行表达的方法及产品，在插入序列中，外源强启动子两端设置了两个终止元件，每个终止元件两端具有不同的重组酶识别位点序列，当插入到宿主基因组编码外显子之前的内含子之中时，两个终止元件将阻止启动子的功能从而抑制靶基因表达，而通过不同的重组酶控制相应的终止元件及启动子的剔除实现内源启动子或外源强启动子调控的基因低剂量或高剂量表达。

摘要： 本发明提供了在不掺入选择性转基因标记的情况下，对植物或植物细胞的基因组中的靶序列进行基因组修饰的组合物和方法。所述方法和组合物采用向导多核苷酸/Cas内切核酸酶系统来提供有效系统，在不掺入选择性转基因标记的情况下，用于修饰或改变植物、植物细胞或种子的基因组内的靶位点。一旦鉴定出基因组靶位点，便可采用多种方法进一步修饰所述靶位点，使得所述靶位点包含多种目的多核苷酸。本发明还公开了育种方法和利用向导多核苷酸/Cas内切核酸酶系统来选择植物的方法。本发明还提供了在不掺入选择性转基因标记的情况下，用于编辑细胞的基因组中的核苷酸序列的组合物和方法。

摘要： 用外源木糖异构酶基因转化酵母细胞。额外的基因修饰增强了所转化的细胞将木糖发酵成乙醇或者其他希望的产物的能力。那些修饰包括缺失非特异或特异的醛糖还原酶基因、缺失木糖醇脱氢酶基因和/或超表达木酮糖激酶。

摘要： 本发明公开了一种靶向血红蛋白HBB突变基因的造血干细胞基因修饰方法，方法一：gRNA1、gRNA2和spCas9‑2.0的mRNA电转进入含血红蛋白HBB突变基因的CD34+细胞；细胞培养1天后，以rAAV‑HBB转染CD34+细胞，收获细胞；方法二：Cas9蛋白与gRNA1、gRNA2混合重组，电转进入CD34+细胞；细胞培养1天后，以rAAV‑HBB转染CD34+细胞，收获细胞。本发明以中国广东广西最常见的HBB突变中CD41/42(‑CTTT)为靶，基因编辑完成后，不在染色体上留下任何其他突变或插入序列，基因编辑效率可达15％～20％。

摘要： 本发明提供了一种提高DC细胞HPV病毒抗原提呈效率的基因修饰方法及其应用，涉及基因修饰技术领域。本发明所述方法，包括：构建pGEM‑T‑rHPV16‑E6E7质粒，使其在宿主菌中实现原核表达；T7启动子驱动的体外转录过程，获得改良的HPV16 mRNA分子；分子转染DC细胞，得到基因修饰的DC细胞。获得的所述经基因修饰的DC细胞，能够显著增强DC细胞中MHC‑I类和II类抗原表位的表达，通过MHC‑I类途径进行抗原递呈，产生CD4+及CD8+杀伤性T细胞，修复患者特异性体液免疫和细胞免疫，进而对HPV16感染组织细胞进行杀伤，全面清除长期感染的HPV16病毒。

摘要： 本发明涉及基因修饰酵母物种和使用基因修饰酵母的发酵方法。具体地，用外源木糖异构酶基因转化酵母细胞。额外的基因修饰增强了所转化的细胞将木糖发酵成乙醇或者其他希望的产物的能力。那些修饰包括缺失非特异或特异的醛糖还原酶基因、缺失木糖醇脱氢酶基因和/或超表达木酮糖激酶。

摘要： 用外源木糖异构酶基因转化酵母细胞。额外的基因修饰增强了所转化的细胞将木糖发酵成乙醇或者其他希望的产物的能力。那些修饰包括缺失非特异或特异的醛糖还原酶基因、缺失木糖醇脱氢酶基因和/或超表达木酮糖激酶。

摘要： 本发明提供一种Cas9的表达更高且能够同时高效地编辑多个不同基因或同一基因内的多个位点的基因修饰非人生物。本发明的基因修饰非人生物的编码Cas9(CRISPR相关核酸酶9)的基因在核基因组中至少具有三个拷贝。本发明的卵细胞来自具有导入了编码Cas9的基因的至少三个拷贝的核基因组的基因修饰非人生物。本发明的受精卵使所述卵细胞与来自同种生物的精子受精而成。本发明的目的基因的修饰方法包括将向导RNA导入来自所述基因修饰非人生物的细胞、所述卵细胞或者所述受精卵中的工序。

摘要： 本发明提出了特定硫酸肝素修饰酶基因修饰的细胞及其构建方法和应用。更进一步地，本发明提出了所述HS3ST5基因在诱导细胞分化成血管中的用途。所述HS3ST5基因可以有效促进细胞，尤其是内皮细胞向成血管方向分化，增强细胞的黏附和增殖、提高血管内皮化效率、增强成血管活性和血管生成相关基因的表达，有助于实现组织工程组织的血管化、解码内皮细胞所构筑的微环境对于实质细胞的影响，在组织器官发育与损伤修复再生、肿瘤发生发展等过程中发挥关键作用，为进一步寻找促进组织再生和疾病(如恶性肿瘤)治疗的策略提供新的模型与思路，具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明提供用于更有效的急性髓性白血病免疫疗法的基因修饰NK细胞系及其用途，所述基因修饰NK细胞系转化宿主免疫细胞以表达包含FLT3特异性单克隆抗体或其功能片段、跨膜结构域和T细胞受体的CD3ζ结构域的癌抗原特异性嵌合抗原受体(CAR)蛋白。