肾癌抑制性消减杂交文库的构建及意义

摘要

目的应用抑制性消减杂交技术构建人肾癌组织与正常肾组织间差异表达的cDNA组成的消减文库. 方法分别从肾癌组织和正常肾组织提取poly A+ RNA,合成双链cDNA,经Rsa I酶切后将肾癌cDNA分为两组并加上不同的DNA接头,再与过量正常肾组织cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,PCR产物与T/A载体连接并转化大肠杆菌构建成cDNA消减文库,文库扩增后随机挑取克隆进行酶切、测序及同源性分析. 结果文库共包含414个阳性克隆,随机挑取265个阳性克隆提取质粒并酶切分析,其中246个克隆有插入片段.将其中40个克隆进行测序,表明1个克隆为新基因片段,其余39个源于35个已知基因. 结论该消减杂交文库质量可靠,它的成功构建为进一步筛选、克隆肾癌差异表达基因提供了依据.