逆向点杂交方法检测耐利福平结核分支杆菌rpoB基因突变

摘要

目的建立一种灵敏、特异、快速检测结核分支杆菌耐药相关基因突变的方法,用于临床对利福平耐药的快速诊断.方法将14条特异性探针固定在尼龙膜上,通过在下游引物标记生物素的方法得到生物素标记的结核分支杆菌DNA PCR扩增产物,与固定在尼龙膜上的特异性探针杂交,杂交物通过链酶亲和素标记辣根过氧化物酶及底物(四甲基联苯胺)显色判定结果.将杂交结果与基因测序结果及药敏试验结果进行对比分析.结果采用逆向点杂交法共检测23株耐利福平及11株敏感型菌株,与药敏试验结果、测序结果符合率分别为28/34和30/34.所发现突变类型依次为:第531位突变11株,第526位突变7株,第533位突变3株.未检测到第516位、第513位碱基突变.结论该方法可用于临床结核分支杆菌对利福平耐药性的快速检测.