尿液环境中肠上皮细胞及其凋亡因子半胱氨酸蛋白酶3、Bax和Bcl-2表达的变化

摘要

背景:回肠代输尿管重建尿路,在临床上取得了较好的疗效.回肠代输尿管后的适应性改变与什么有关目前尚未见有关报道.此次研究希望通过观察尿液对肠上皮细胞内凋亡因子表达的影响,进一步探讨背后可能的机制,为回肠代输尿管后的病理学特点提供实验依据.目的:观察尿液环境对肠上皮细胞内凋亡因子半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、Bax、Bcl-2表达的影响,进一步探讨尿液环境是否促进了肠上皮细胞的凋亡及其机制.方法:选取人工尿液分别与培养基按0,1:1,1:2,1:4,1:8,1:16,1:32,1:64,1:128进行稀释,处理人正常肠上皮细胞,分别处理24,48,72 h,用CCK-8法检测,观察尿液对肠上皮细胞增殖的影响.采用RT-PCR法和Western blot法检测肠上皮细胞中Caspase-3、Bax和Bcl-2的mRNA和蛋白表达情况.结果与结论:①肠上皮细胞内凋亡因子Caspase-3、Bax在尿液浓度最高的组中呈高表达,随着尿液浓度梯度的不断降低,表达水平逐渐降低;②肠上皮细胞内抗凋亡因子Bcl-2在尿液浓度高的组中(1:8和1:16组)呈低表达,随着尿液浓度梯度的不断降低,表达水平逐渐升高;③提示尿液浓度越高,促凋亡因子Caspase-3、Bax在肠上皮细胞内呈高表达,而抑制凋亡因子Bcl-2呈低表达,表明尿液对肠道上皮细胞具有凋亡促进作用.