碱性成纤维细胞生长因子及胰岛素样生长因子1对精原干细胞增殖凋亡影响的机制

摘要

cqvip:背景:生长因子作为体外细胞培养和体内细胞生长及增殖必需的调节因子,一直被广泛的关注。目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)与胰岛素样生长因子1(insulin-like growth facter,IGF-1)联合作用对小鼠精原干细胞增殖、凋亡的影响。方法:从6-8 d龄昆明雄性小鼠睾丸内分离培养精原干细胞并进行鉴定。将精原干细胞接种于经丝裂霉素C处理过的胚胎成纤维细胞饲养层上,分组干预:对照组加入正常DMEM培养基进行培养;bFGF、IGF-1组分别加入含20μg/L bFGF、20μg/L IGF-1的DMEM培养基进行培养;bFGF+IGF-1组同时加入含20μg/L bFGF及20μg/L IGF-1的DMEM培养基进行培养。采用CCK-8、EDU染色法分别检测精原干细胞增殖活性,流式细胞仪检测精原干细胞生长周期和细胞凋亡情况,Western blot检测增殖和凋亡相关蛋白PCNA、Bax、Bcl-2的表达。结果与结论:①与对照组比较,bFGF组、IGF-1组、bFGF+IGF-1组吸光度值显著升高,与bFGF组、IGF-1组比较,bFGF+IGF-1组吸光度值进一步升高(P<0.05),EDU染色得到与CCK-8实验一致的结论;②bFGF+IGF-1组S+G 2/M期细胞比例明显高于其他3组(P<0.05),IGF-1组、bFGF组S+G 2/M期细胞比例高于对照组(P<0.05);③与对照组比较,bFGF组、IGF-1组、bFGF+IGF-1组凋亡细胞降低;与bFGF组、IGF-1组比较,bFGF+IGF-1组凋亡细胞进一步降低;④与对照组比较,bFGF组、IGF-1组、bFGF+IGF-1组细胞中Bax蛋白相对表达水平显著下降(P<0.01),Bcl-2和PCNA蛋白相对表达水平均显著升高(P<0.05)。与bFGF组、IGF-1组比较,bFGF+IGF-1组细胞中Bax蛋白相对表达水平进一步下降(P<0.01),Bcl-2和PCNA蛋白相对表达水平进一步升高(P<0.05);⑤结果表明,bFGF、IGF-1通过上调PCNA和Bcl-2蛋白的表达,下调Bax蛋白的表达,促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,二者联合作用效果最佳。