养精胶囊提取液对GC-1精原干细胞增殖的影响及机制研究

摘要

[目的]观察养精胶囊提取液对GC-1细胞增殖的影响，并探讨其具体的作用机制。
　　[方法]以体外小鼠精原细胞系GC-1细胞培养为模型，用无血清培养液诱导GC-1细胞凋亡，继而加入养精胶囊提取液（0.01～1 mg/mL）作用后，用MTT法检测细胞的活性;用流式细胞仪检测细胞周期;实时荧光定量PCR法和Western blot法检测OCT4和PLZF的mRNA和蛋白质的表达;利用GFRa1 siRNA和LY294002探究其作用机制;通过流式细胞仪检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR法和Western blot法检测caspase-3的表达。
　　[结果]养精胶囊提取液加入GC-1细胞后，能够显著增加细胞的活力;能降低G0/G1期细胞比例，增加S期细胞比例;OCT4和PLZF的mRNA和蛋白质的表达水平增加;使用GFRa1 siRNA和LY294002处理后，明显抑制了养精胶囊提取液对GC-1细胞的增殖，降低了养精胶囊提取液对OCT4和PLZF的mRNA和蛋白质的表达;能抑制GC-1细胞的凋亡，下降细胞内caspase-3的mRNA和蛋白质的表达。
　　[结论]养精胶囊提取液能促进GC-1细胞的增殖。通过结合GFRa1，养精胶囊提取液能引发PI3K/AKT通路的激活，最终导致GC-1细胞的增殖，并且抑制细胞的凋亡。

目录

声明

摘要

前言

第一部分 理论研究

1 精子发生的基础

1．1 精原细胞的来源

1．2 精原细胞的发育过程

1．3 精原细胞的发育调控

2 现代医学对不育症的研究

2．1 定义

2．2 病因

2．3 西医对不育症的治疗

3 肾藏精，主生殖的理论研究

3．1 肾藏精

3．2 肾与生殖功能

4 中医学对不育症的研究

4．1 关于男性不育症认识的古代文献研究

4．2 当代医家对男性不育症病因病机及治疗的研究

第二部分 实验研究

1 实验材料及溶液的配制

1．1 主要试剂

1．2 主要仪器设备

1．3 主要溶液的配制

2 实验方法

2．1 GC-1细胞的培养及分组

2．2 养精胶囊提取液对GC-1细胞增殖活性的影响

2．3 养精胶囊提取液对GC-1细胞周期的影响

2．4 养精胶囊提取液对OCT4、PLZF表达的影响

2．5 阻断GFRal或PI3K通路后，养精胶囊提取液对GC-1细胞增殖活性的影响

2．6 阻断GFRal或PI3K通路后，养精胶囊提取液对OCT4、PLZF表达的影响

2．7 养精胶囊提取液对GC-1细胞凋亡的影响

2．8 养精胶囊提取液对caspase-3表达的影响

3 统计学处理

4 结果

4．1 MTT法分析养精胶囊提取液对GC-1细胞增殖活性的影响

4．2 流式细胞仪分析养精胶囊提取液对GC-1细胞周期的影响

4．3 Real-time PCR和Western blot方法分析养精胶囊提取液对OCT4、PLZF表达的影响

4．4 MTT法分析阻断GFRal或PI3K通路后，养精胶囊提取液对GC-1细胞增殖活性的影响

4．5 Real-time PCR和Western blot方法分析阻断GFRal或PI3K通路后，养精胶囊提取液对OCT4、PLZF表达的影响

4．6 流式细胞仪分析养精胶囊提取液对GC-1细胞凋亡的影响

4．7 Real-time PCR和Western blot方法分析养精胶囊提取液对caspase-3表达的影响

第三部分 讨论

1 养精胶囊方药研究

1．1 淫羊藿

1．2 熟地黄

1．3 黄精

1．4 紫河车

1．5 当归

2 养精胶囊的前期研究

2．1 临床研究

2．1 实验研究

3 养精胶囊促进GC-1细胞增殖的机理探讨

4 精胶囊对GC-1细胞凋亡的影响

结语

参考文献

附录

攻读硕士期间取得的学术成果及奖励

致谢