养精胶囊提取液通过上调POU3F1促进GC-1精原干细胞增殖的机制研究

摘要

目的：观察养精胶囊是否通过上调POU3F1促进GC-1细胞的增殖，并探讨其具体的信号通路机制。
　　方法：以体外小鼠精原细胞系GC-1细胞培养为模型，用无血清培养液诱导GC-1细胞凋亡，继而加入养精胶囊提取液(0.01，0.1，1 mg/mL)作用48小时后，用MTT法检测细胞的活性;实时荧光定量PCR法和Western blot法检测POU3F1的mRNA和蛋白质的表达;利用POU3F1 siRNA，GFRα1 siRNA和LY294002分别阻断GDNF-PI3K/Akt-POU3F1通路的上下游，探究其作用机制。
　　结果：养精胶囊提取液加入GC-1细胞后，能够显著增加细胞的活力，POU3F1的mRNA和蛋白质的表达水平增加;使用POU3F1 siRNA，GFRα1 siRNA和LY294002处理后，明显抑制了养精胶囊提取液对GC-1细胞的增殖，降低了养精胶囊提取液对POU3F1的mRNA和蛋白质的表达。
　　结论：养精胶囊提取液能促进GC-1细胞的增殖。通过结合GFRα1，养精胶囊提取液能引发PI3K/AKT通路的激活，上调POU3F1的表达，最终导致GC-1细胞的增殖。

目录

声明

摘要

前言

第一部分 理论研究

1 男性生殖生理

1．1 精子的发生

1．2 附睾精子成熟

1．3 精子获能

2 精原干细胞研究进展

2．1 精原干细胞的起源

2．2 精原干细胞的增殖与分化

2．3 精原干细胞的分子标记及调控

2．4 GDNF促进精原干细胞增殖的信号通路

2．5 POU3F1促进精原干细胞增殖的作用

3 肾藏精，主生殖的理论研究

3．1 肾藏精理论

3．2 肾与生殖功能的关系

3．3 补肾填精法治疗不育症的研究进展

3．4 精原干细胞与先天之精的关系

第二部分 实验研究

1 实验材料及溶液的配制

1．1 主要试剂

1．2 主要仪器设备

1．3 主要溶液的配制

2 实验方法

2．1 GC-1细胞的培养及分组

2．2 养精胶囊提取液对GC-1细胞增殖活性的影响

2．3 养精胶囊提取液对POU3F1表达的影响

2．4 阻断POU3F1通路后，养精胶囊提取液对GC-1细胞增殖活性的影响

2．5 阻断POU3F1通路后，养精胶囊提取液对POU3F1表达的影响

2．6 阻断PI3K通路后，养精胶囊提取液对POU3F1表达的影响

2．7 阻断GFRα1通路后，养精胶囊提取液对POU3F1表达的影响

3 统计学处理

4 结果

4．1 MTT法分析养精胶囊提取液对GC-1细胞增殖活性的影响

4．2 Real-time PCR和Western blot方法分析养精胶囊提取液对POU3F1表达的影响

4．3 MTT法分析阻断POU3F1通路后，养精胶囊提取液对GC-1细胞增殖活性的影响

4．4 Real-time PCR和Western blot方法分析阻断POU3F1通路后，养精胶囊提取液对POU3F1表达的影响

4．5 Real-time PCR和Western blot方法分析阻断P13K通路后，养精胶囊提取液对POU3F1表达的影响

4．6 Real-time PCR和Western blot方法分析阻断GFRa1通路后，养精胶囊提取液对POU3F1表达的影响

第三部分 讨论

1 养精胶囊方药研究

1．1 淫羊藿

1．2 熟地黄

1．3 黄精

1．4 紫河车

1．5 当归

2 养精胶囊的前期研究

3 养精胶囊通过上调POU3F1促进GC-1细胞增殖的机理探讨

结语

参考文献

附录

攻读硕士期间取得的学术成果及奖励

致谢